Полиморфизм длина фрагмента ограничения (ПДРФ) Процедура эксперимента для студента

я. Цель

Узнайте и освоить основные принципы и методы обнаружения полиморфизма длины ограничения. (ПДРФ) генетические маркеры.

II. Принцип

Первое поколение молекулярных генетических маркеров, ПДРФ, основан на мутациях на сайтах резания ферментов рестрикции в геномах разных сортов (отдельные лица). Эти мутации могут включать в себя базовые изменения, вставки, удаления, или перегруппировки между участками вырезания ферментов, приводя к вариациям размеров фрагментов. Эти вариации могут быть обнаружены через ПЦР, Ограничение пищеварение ферментов, и электрофорез агарозного геля, позволяя сравнить различия на уровне ДНК (то есть, полиморфизм) между разными сортами (отдельные лица). RFLP широко использовался в конструировании геномных генетических карт, локализация генов, Биологическая эволюция и классификация, и исследования генетического разнообразия.

III. Инструменты, Материалы, и реагенты

Инструменты:

• Электрическая постоянная температура водяная баня
• Электрофорез и системы обнаружения агарозного геля

Материалы и реагенты:

• Hind III Ограничение фермент
• 10× м буфер
• Продукт для ПЦР для проанализирования
• DL2000 ДНК -маркер
• 6× загрузочный буфер
• Стерильная двукратная вода
• 1.5% агарозный гель (Примечание: Содержит бромид этидия (EB), который канцерогенный; ручка с перчатками)
• 0.5% Поступил (Электрофорез Буфер)

IV. Процедура

1. Хинд III Ограничение

   • Объем реакции: 10 мкл в а 0.2 Ml Eppendorf Tube
   • Добавьте следующее в порядке:
     • 10× м буфер: 1 мкл
     • ddH2O: 5.5 мкл
     • Хинд III: 0.5 мкл
     • ПЦР продукт: 3 мкл
   • Переваривать в 37 ℃ в водяной бане для 2 часы. Используйте весь продукт пищеварения для обнаружения геля агарозного геля.

2. Электрофорез в агарозном геле

   • Подготовить 1.5% агарозный гель.
   • Смешивание 10 мкл продукта пищеварения с 1 мкл погрузочного буфера.
   • Выполнить электрофорез при постоянном напряжении 180 В.
   • ДНК несет отрицательный заряд, Таким образом, он будет мигрировать от негативного к положительному электроду во время электрофореза..
   • Остановить электрофорез, когда ДНК мигрировала в 1/2 к 2/3 длины геля. Наблюдайте под ультрафиолетовым детектором.

В. Назначение

Напишите подробную процедуру этого эксперимента и опишите результаты, которые вы наблюдали (в том числе рисунки).