나. 목적
Restriction Fragment Length Polymorphism의 기본 원리와 검출 방법을 배우고 익히세요. (RFLP) 유전적 표지.
II. 원칙
1세대 분자유전학적 마커, RFLP, 다양한 품종의 게놈에 있는 제한 효소 절단 부위의 돌연변이에 기초합니다. (개인). 이러한 돌연변이에는 염기 변화가 포함될 수 있습니다., 삽입, 삭제, 또는 효소 절단 부위 사이의 재배열, 조각 크기의 변화로 이어짐. 이러한 변형은 다음을 통해 감지할 수 있습니다. PCR, 제한효소 소화, 아가로스 겔 전기영동, DNA 수준 차이의 비교 가능 (즉., 다형성) 다양한 품종 사이 (개인). RFLP는 게놈 유전자 지도 구축에 널리 사용되어 왔습니다., 유전자 위치화, 생물학적 진화와 분류, 유전적 다양성 연구.
III. 악기, 재료, 및 시약
악기:
- 전기 항온 수조
- 아가로스 겔 전기영동 및 검출 시스템
재료 및 시약:
- Hind III 제한효소
- 10×M 버퍼
- 분석할 PCR 산물
- DL2000 DNA 마커
- 6×버퍼 로딩
- 멸균 이중 증류수
- 1.5% 아가로스 젤 (메모: 에티듐브로마이드 함유 (EB), 발암성이 있는 것; 장갑을 끼고 다루다)
- 0.5% TBE (전기영동 완충액)
IV. 절차
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뒷다리 III 제한 효소 소화
- 반응량: 10 μL 0.2 mL 에펜도르프 튜브
- 다음을 순서대로 추가하세요:
- 10×M 버퍼: 1 μL
- ddH2O: 5.5 μL
- 하인드 III: 0.5 μL
- PCR 생성물: 3 μL
- 37℃ 수조에서 소화 2 시간. 아가로스 겔 검출을 위해 전체 소화 제품을 사용하십시오..
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아가로스 겔 전기영동
- 준비하다 1.5% 아가로스 젤.
- 혼합 10 μL의 소화 생성물 1 로딩 버퍼의 μL.
- 180V의 일정한 전압에서 전기영동을 수행합니다..
- DNA는 음전하를 띤다, 그래서 전기영동 중에 음극에서 양극으로 이동하게 됩니다..
- DNA가 이동한 경우 전기영동을 중지합니다. 1/2 에게 2/3 젤의 길이. UV 검출기로 관찰.
V. 과제
이 실험의 세부 절차를 작성하고 관찰한 결과를 설명하세요. (그림을 포함하여).
