私. 客観的
制限断片の長さ多型の基本原則と検出方法を学び、習得する (RFLP) 遺伝マーカー.
Ⅱ. 原理
分子遺伝マーカーの第一世代, RFLP, さまざまな品種のゲノムの制限酵素切断部位の突然変異に基づいています (個人). これらの突然変異には、根拠の変化が含まれます, 挿入, 削除, または、酵素カット部位間の再配列, フラグメントサイズのバリエーションにつながります. これらのバリエーションは介して検出できます PCR, 制限酵素消化, アガロースゲル電気泳動, DNAレベルの違いの比較を可能にします (つまり, 多型) 異なる品種間 (個人). RFLPは、ゲノム遺伝子マップの構築に広く使用されています, 遺伝子局在, 生物学的進化と分類, および遺伝的多様性研究.
Ⅲ. 楽器, 材料, および試薬
楽器:
- 電気一定温度水浴
- アガロースゲル電気泳動および検出システム
材料と試薬:
- Hind III制限酵素
- 10×Mバッファー
- 分析するPCR製品
- DL2000 DNAマーカー
- 6×負荷バッファ
- 滅菌二重に留められた水
- 1.5% アガロースゲル (注記: 臭化エチジウムが含まれています (eb), 発がん性です; 手袋で扱います)
- 0.5% 未定 (電気泳動緩衝液)
IV. 手順
-
Hind III制限酵素消化
- 反応量: 10 aのμl 0.2 ML Eppendorfチューブ
- 順番に以下を追加します:
- 10×Mバッファー: 1 μL
- DDH2O: 5.5 μL
- Hind III: 0.5 μL
- PCR製品: 3 μL
- 水浴で37℃で消化します 2 時間. アガロースゲル検出には、消化製品全体を使用します.
-
アガロースゲル電気泳動
- を準備します。 1.5% アガロースゲル.
- ミックス 10 消化生成物のμl 1 μLの負荷バッファー.
- 180Vの一定の電圧で電気泳動を実行します.
- DNAには負電荷があります, したがって、電気泳動中にネガティブから正の電極に移動します.
- DNAが移動したときに電気泳動を停止します 1/2 に 2/3 ジェルの長さの. UV検出器の下で観察します.
V. 割り当て
この実験の詳細な手順を書いて、観察した結果を説明してください (図面を含む).
