我. 客觀的
學習並掌握限制性片段長度多態性的基本原理與偵測方法 (RFLP) 遺傳標記.
二. 原則
第一代分子遺傳標記, RFLP, 基於不同品種基因組中限制性酵素切位點的突變 (個人). 這些突變可能包括鹼基變化, 插入, 刪除, 或酶切位點之間的重排, 導致片段大小的變化. 這些變化可以透過以下方式檢測到 聚合酶鍊式反應, 限制性內切酶消化, 和瓊脂糖凝膠電泳, 允許比較 DNA 水平差異 (IE。, 多態性) 不同品種之間 (個人). RFLP已廣泛應用於建構基因組遺傳圖譜, 基因定位, 生物演化與分類, 和遺傳多樣性研究.
三、. 儀器, 材料, 和試劑
儀器:
- 電溫水浴鍋
- 瓊脂糖凝膠電泳檢測系統
材料與試劑:
- Hind III 限制性內切酶
- 10×M緩衝液
- 待分析的 PCR 產物
- DL2000 DNA 標記物
- 6×加載緩衝液
- 無菌雙蒸水
- 1.5% 瓊脂糖凝膠 (筆記: 含有溴化乙錠 (EB), 這是致癌的; 帶手套處理)
- 0.5% TBE (電泳緩衝液)
四號. 程式
-
Hind III 限制性內切酶消化
- 反應體積: 10 µL 於 0.2 mL Eppendorf 管
- 按順序新增以下內容:
- 10×M緩衝液: 1 微升
- 水: 5.5 微升
- 海因德三世: 0.5 微升
- PCR產物: 3 微升
- 37℃水浴消化 2 小時. 使用整個消化產物進行瓊脂糖凝膠檢測.
-
瓊脂糖凝膠電泳
- 準備一個 1.5% 瓊脂糖凝膠.
- 混合 10 消化產物μL 1 µL 上樣緩衝液.
- 180V恆壓電泳.
- DNA帶有負電荷, 所以在電泳過程中它會從負極遷移到正極.
- 當 DNA 遷移至 1/2 到 2/3 凝膠的長度. 在紫外線檢測器下觀察.
V. 任務
寫出這個實驗的詳細過程並描述你觀察到的結果 (包括圖紙).
