Набор для экстракции геномной ДНК крови

1. Компоненты набора реагентов

Технические характеристики	50Т	100Т
Кот. Нет.	SN0219	SN0220
Колонки для экстракции ДНК (набор)	50 (набор)	100 (набор)
Реагентный буфер B	20 мл	2 × 20 мл
Реагентный буфер C	30 мл	2 × 30 мл
10× буфер лизиса эритроцитов	60 мл	2 × 60 мл
Промывной буфер 1	15 мл	2 × 15 мл
Элюирующий буфер	20 мл	20 мл
Протеиназа К	1мл	2х1мл
РНКазаА	1мл	2х1мл
Инструкция по эксплуатации	1	1

2. Хранилище

Этот набор реагентов следует хранить при комнатной температуре. (15-25℃) и в сухих условиях, со сроком годности 12 месяцы. Колонки для экстракционной очистки ДНК можно хранить в течение 1 год в прохладной и сухой среде. протеиназа К и РНКаза А содержат консерванты, возможность транспортировки при комнатной температуре, но для длительного хранения, их следует хранить при -20 ℃.

3. Инструкции по использованию набора реагентов

3.1 Этот набор реагентов предназначен для исследований в области молекулярной биологии и не должен использоваться для диагностики или лечения заболеваний..

3.2 Некоторые компоненты набора реагентов содержат раздражители.. Рекомендуются защитные меры, такие как ношение защитной одежды и очков..

3.3 Во время использования этого набора реагентов, высокоскоростная центрифуга, водяная баня (металлическая ванна), вихревой смеситель, безводный этанол, стерильная деионизированная вода, и EP-трубки должны быть подготовлены пользователем..

4. Знакомство с набором реагентов

Кровь Очистка ДНК Набор реагентов предлагает быстрый и эффективный метод очистки ДНК из крови и других жидкостей организма. Лизирующими эритроцитами с буфером лизиса эритроцитов эритроциты, ДНК можно эффективно собрать.

 

Набор быстрого очистки ДНК крови может извлекать общую ДНК из цельной крови (включая кровь, сыворотка, плазма, и другие телесные жидкости) в пределах 30 минуты. Весь процесс очистки не требует токсичных реагентов, таких как фенол-хлороформ. Выделенная ДНК может быть непосредственно использована для ПЦР, Саузерн-блоттинг, и другие приложения.

5. Экспериментальные принципы и процедуры

6. Процесс экстракции

Прежде чем начать эксперимент:

А. Буфер лизиса эритроцитов 1x препарат 1x препарат: Разбавить 10-кратный буфер лизиса эритроцитов до 1x объема с использованием воды без РНКазы.

Б. Реагент буфер B и буфер реагентов C может осаждать при низких температурах. Рекомендуется нагревать при температуре 65℃ для 5 Протокол, чтобы растворить осадок перед использованием.

С. Перед использованием Промывной буфер 1, добавьте указанное количество безводного этанола, указанное на этикетке флакона с реагентом., и отметьте проверку на этикетке, чтобы указать добавление этанола.

Д. Элюирующий буфер представляет собой 0.1х ТЕ решение с минимальной ЭДТА. Если ЭДТА может повлиять на последующие эксперименты, Предполагается заменить буфер элюирования стерильной деионизированной водой.

1. Обработка образцов: (Собирать 0.1-5 ML Образцы крови)

А. Добавлять 2-3 Времена объема 1x буфер лизиса эритроцитовк крови или образцу (Разбавьте буфер лизиса эритроцитов в эритроцитах до использования.), тщательно перемешать, центрифуга в 12,000 об/мин для 1 минута, осторожно удалить супернатант. Осадок должен теоретически быть белым или бледно -красным. Добавить буфер реагентов B в осадок (Для образцов крови 0,1-1 мл, добавлять 200мклРеагентный буфер B; Для 1-2 мл образцов крови, добавлять 400мкл Реагентный буфер B).

Б. При обработке образцов из организмов низкого уровня, таких как птица или птицы с зародыми эритроцитами, требуется меньший объем образца. В таких случаях, Опустите 1 -кратный буфер лизиса эритроцитов и напрямую добавьте 400мклРеагента буфера B и 20мкл рнасиа (10 мг/мл), тщательно перемешать, и инкубировать при комнатной температуре в течение 5 минуты.

2. Добавлять 10мклРНКазаА (10 мг/мл), 20мкл Протеиназа К (10 мг/мл), тщательно перемешать, переваривать в 65 ℃ для 10 минуты. В этот период, перевернуть и перемешать 2-3 раз до завершения пищеварения.

3. Добавлять 200мклРеагента буфера c к лизату, Смешайте с помощью пипетки, добавлять 200мкл безводного этанола, Смешайте с помощью пипетки.

4. Примените полученную жидкость к колонке очистки экстракции ДНК (набор) (примерно 650~700 мкл каждый раз), центрифуга в 12,000 об/мин для 30 секунды, выбросить собранные отходы, и переосмыслить трубку сбора в колонку очистки ДНК-экстракции (набор) для следующего шага.

5. Добавлять 700мклбуфера удаления ингибирования, центрифуга в 12,000 об/мин для 30 секунды, выбросить отходы.

6. Поместите колонку для очистки экстракции ДНК (набор) в новой коллекционной трубке, добавлять 500мклпромывочного буфера 1, центрифуга в 12,000 об/мин для 30 секунды, выбросить отходы, и переосмыслить колонку очищения ДНК-экстракции (набор) в трубку для сбора для следующего шага.

(Примечание: Обеспечить добавление безводного этанола в промывочный буфер 1.)

7. Повторить шаг 6.

8. Поместите колонку для очистки экстракции ДНК (набор) в новую центрифужную пробирку, раскрыть, инкубировать при 65 ℃ в водяной бане для 2 минуты. Продолжите этот шаг надлежащим образом, чтобы максимально испарить этанол, чтобы предотвратить воздействие остатков этанола, влияя на эксперименты вниз по течению.

9. Приостановить 50-100мклэлюирования буфера на мембрану колонны, центрифуга в 12,000 об/мин для 1 минута, и собрать ДНК.

(Примечание: 1. Элюирование ДНК с помощью 50мкл буфера элюции может увеличить концентрацию ДНК, но снижает общий выход ДНК; 2. Элюированная промывка ДНК может быть повторно применить в колонку очистки ДНК -экстракции. Центрифуга в 12,000 об/мин для 1 минута снова, чтобы увеличить ДНК yielд.