혈액 게놈 DNA 추출 키트

1. 시약 키트의 구성 요소

명세서	50티	100티
고양이. 아니요.	SN0219	SN0220
DNA 추출 컬럼 (세트)	50 (세트)	100 (세트)
시약 완충액 B	20 밀리리터	2 × 20 밀리리터
시약 완충액 C	30 밀리리터	2 × 30ml
10×적혈구 용해 완충액	60 밀리리터	2 × 60ml
세척 버퍼 1	15 밀리리터	2 × 15 밀리리터
용출 버퍼	20 밀리리터	20 밀리리터
단백질분해효소 K	1밀리리터	2x1ml
RNaseA	1밀리리터	2x1ml
사용 설명서	1	1

2. 저장

이 시약 키트는 실온에서 보관해야 합니다. (15-25℃) 그리고 건조한 환경에서는, 유효기간이 있는 12 개월. DNA 추출 정제 컬럼은 다음 용도로 보관할 수 있습니다. 1 시원하고 건조한 환경에서 1년 동안. 단백질분해효소 K 및 RNase A 방부제 함유, 실온에서 운송 가능, 하지만 장기간 보관을 위해서는, -20℃에 보관해야 합니다.

3. 시약 키트 사용 지침

3.1 이 시약 키트는 분자생물학 연구용이므로 질병 진단이나 치료에 사용해서는 안 됩니다..

3.2 시약 키트의 일부 구성품에는 자극제가 포함되어 있습니다.. 보호복, 고글 착용 등의 보호 조치가 권장됩니다..

3.3 이 시약 키트를 사용하는 동안, 고속 원심분리기, 욕조 (금속 욕조), 소용돌이 믹서, 무수에탄올, 멸균 탈이온수, EP 튜브는 사용자가 준비해야 합니다..

4. 시약 키트 소개

더 블러드 DNA 정제 시약 키트는 혈액 및 기타 체액에서 DNA를 정제하는 빠르고 효과적인 방법을 제공합니다.. 적혈구 용해 완충액으로 적혈구를 용해하여, DNA를 효율적으로 수집할 수 있습니다..

 

혈액 DNA 신속 정제 키트는 전혈에서 전체 DNA를 추출할 수 있습니다. (피를 포함하여, 혈청, 혈장, 그리고 다른 체액) 이내에 30 분. 전체 정제 공정에는 페놀-클로로포름과 같은 독성 시약이 필요하지 않습니다.. 추출된 DNA는 다음과 같은 목적으로 직접 사용될 수 있습니다. PCR, 서던 블로팅, 및 기타 응용 프로그램.

5. 실험 원리 및 절차

6. 추출과정

실험을 시작하기 전에:

ㅏ. 적혈구 용해 완충액 1x 준비: RNase가 없는 물을 사용하여 10x 적혈구 용해 완충액을 1x 부피로 희석합니다..

비. 시약 완충액 B 및 시약 완충액 C 낮은 온도에서는 침전될 수 있음. 65℃로 가열하는 것이 좋습니다. 5 사용 전 침전물을 용해시키는 데 몇 분.

씨. 사용하기 전에 세척 버퍼 1, 시약병 라벨에 표시된 규정량의 무수에탄올을 첨가합니다., 에탄올 첨가를 나타내기 위해 라벨에 체크 표시를 하십시오..

디. 용출 완충액은 0.1x TE 솔루션 최소한의 EDTA로. EDTA가 후속 실험에 영향을 미칠 수 있는 경우, Elution Buffer를 멸균 탈이온수로 대체하는 것이 좋습니다..

1. 샘플 취급: (모으다 0.1-5 ml 혈액 샘플)

ㅏ. 추가하다 2-3 부피의 배 1x 적혈구 용해 완충액혈액이나 샘플에 (사용 전 적혈구 용해 완충액을 10~1배로 희석하세요.), 잘 섞는다, 원심분리기 12,000 rpm 1 분, 조심스럽게 상등액을 제거. 침전물은 이론적으로 흰색 또는 연한 빨간색이어야 합니다.. 침전물에 시약 완충액 B를 추가합니다. (0.1-1ml 혈액 샘플의 경우, 추가하다 200μL시약 완충액 B; 1-2ml 혈액 샘플의 경우, 추가하다 400μL 시약 완충액 B).

비. 유핵 적혈구가 있는 가금류나 조류와 같은 저수준 유기체의 검체를 취급하는 경우, 더 적은 양의 샘플이 필요합니다.. 그러한 경우, 1x Red Blood Cell Lysis Buffer를 생략하고 직접 첨가합니다. 400μL시약 완충액 B 및 20μL RNaseA의 (10 mg/ml), 잘 섞는다, 그리고 실온에서 배양하세요 5 분.

2. 추가하다 10μLRNaseA (10 mg/ml), 20μL 단백질분해효소 K (10 mg/ml), 잘 섞는다, 65℃에서 소화 10 분. 이 기간 동안, 뒤집어서 섞는다 2-3 소화가 완료될 때까지의 시간.

3. 추가하다 200μL시약 완충액 C 용해물에, 피펫팅으로 섞는다, 추가하다 200μL 무수에탄올의, 피펫팅으로 섞는다.

4. 얻은 액체를 DNA 추출 정제 컬럼에 적용 (세트) (매번 약 650~700μl), 원심분리기 12,000 rpm 30 초, 수거된 폐기물을 폐기하다, 수집 튜브를 DNA 추출 정제 컬럼에 다시 삽입합니다. (세트) 다음 단계를 위해.

5. 추가하다 700μL억제 제거 완충액, 원심분리기 12,000 rpm 30 초, 폐기물을 버리다.

6. DNA 추출 정제 컬럼을 배치합니다. (세트) 새 수집 튜브에, 추가하다 500μL세척 완충액 1, 원심분리기 12,000 rpm 30 초, 폐기물을 버리다, DNA 추출 정제 컬럼을 다시 삽입합니다. (세트) 다음 단계를 위해 수집 튜브에 넣습니다..

(메모: 세척 완충액에 무수 에탄올이 추가되었는지 확인하세요. 1.)

7. 단계 반복 6.

8. DNA 추출 정제 컬럼을 배치합니다. (세트) 새로운 원심분리 튜브에, 폭로하다, 65℃ 수조에서 배양 2 분. 에탄올 잔류물이 다운스트림 실험에 영향을 미치지 않도록 이 단계를 적절하게 확장하여 에탄올을 최대한 증발시키세요..

9. 유예하다 50-100μL용출 완충액 컬럼의 막 위에, 원심분리기 12,000 rpm 1 분, DNA를 수집하고.

(메모: 1. DNA 용출 50μL Elution Buffer는 DNA 농도를 증가시키지만 총 DNA 수율을 감소시킵니다.; 2. 용출된 DNA 세척액은 DNA 추출 정제 컬럼에 재적용 가능. 원심분리기 12,000 rpm 1 DNA 수율을 높이기 위해 다시 1분디.