1. Componenti del kit di reagenti
| Specifiche | 50T | 100T |
| Gatto. NO. | SN0219 | SN0220 |
| Colonne di estrazione del DNA (impostato) | 50 (impostato) | 100 (impostato) |
| Tampone reagente B | 20 ml | 2 × 20 ml |
| Tampone reagente C | 30 ml | 2 × 30 ml |
| 10× Tampone di lisi dei globuli rossi | 60 ml | 2 ×60 ml |
| Tampone di lavaggio 1 | 15 ml | 2 × 15 ml |
| Tampone di eluizione | 20 ml | 20 ml |
| Proteinasi K | 1ml | 2x1 ml |
| RNasiA | 1ml | 2x1 ml |
| Manuale di istruzioni | 1 | 1 |
2. Magazzinaggio
Questo kit di reagenti deve essere conservato a temperatura ambiente (15-25℃) e in condizioni asciutte, con una durata di conservazione di 12 mesi. Le colonne di purificazione per l'estrazione del DNA possono essere conservate per 1 anno in un ambiente fresco e asciutto. Proteinasi K e RNasi A contengono conservanti, consentendo il trasporto a temperatura ambiente, ma per la conservazione a lungo termine, dovrebbero essere mantenuti a -20 ℃.
3. Istruzioni per l'uso del kit di reagenti
3.1 Questo kit di reagenti è destinato alla ricerca di biologia molecolare e non deve essere utilizzato per la diagnosi o il trattamento di malattie.
3.2 Alcuni componenti del kit di reagenti contengono sostanze irritanti. Si raccomandano misure protettive come indossare indumenti protettivi e occhiali protettivi.
3.3 Durante l'utilizzo di questo kit di reagenti, una centrifuga ad alta velocità, bagnomaria (bagno di metallo), miscelatore a vortice, etanolo anidro, acqua deionizzata sterile, e le provette EP devono essere preparate dall'utente.
4. Introduzione al kit di reagenti
Il sangue Purificazione del DNA Reagent Kit offre un metodo rapido ed efficace per purificare il DNA dal sangue e da altri fluidi corporei. Lisando i globuli rossi con un tampone di lisi dei globuli rossi, Il DNA può essere raccolto in modo efficiente.
Il kit di purificazione rapida del DNA sanguigno può estrarre il DNA totale dal sangue intero (compreso il sangue, siero, plasma, e altri fluidi corporei) entro 30 minuti. L’intero processo di purificazione non richiede reagenti tossici come il fenolo-cloroformio. Il DNA estratto può essere utilizzato direttamente per PCR, Southernblotting, e altre applicazioni.
5. Principi e procedure sperimentali
6. Processo di estrazione
Prima di iniziare l'esperimento:
UN. Tampone di lisi dei globuli rossi 1x Preparazione: Diluire il tampone di lisi dei globuli rossi 10x a 1x volume utilizzando acqua priva di RNasi.
B. Tampone reagente B e Tampone reagente C può precipitare a basse temperature. Si consiglia di riscaldare a 65 ℃ per 5 minuti per sciogliere il precipitato prima dell'uso.
C. Prima dell'uso Tampone di lavaggio 1, aggiungere la quantità specificata di etanolo anidro come indicato sull'etichetta del flacone del reagente, e segnare un segno di spunta sull'etichetta per indicare l'aggiunta di etanolo.
D. Il tampone di eluizione è un 0.1x soluzione TE con EDTA minimo. Se l'EDTA potrebbe influenzare gli esperimenti successivi, si consiglia di sostituire il tampone di eluizione con acqua deionizzata sterile.
- Gestione dei campioni: (Raccogliere 0.1-5 ml di campioni di sangue)
UN. Aggiungere 2-3 volte il volume di 1x tampone di lisi dei globuli rossial sangue o al campione (Diluire il tampone di lisi dei globuli rossi da 10 a 1 prima dell'uso), mescolare accuratamente, centrifugare a 12,000 giri al minuto per 1 minuto, rimuovere con attenzione il surnatante. Il precipitato dovrebbe teoricamente essere bianco o rosso pallido. Aggiungere il tampone reagente B al precipitato (per campioni di sangue da 0,1-1 ml, aggiungere 200μLTampone reagente B; per campioni di sangue da 1-2 ml, aggiungere 400μL Tampone reagente B).
B. Se si maneggiano campioni provenienti da organismi di basso livello come pollame o uccelli con globuli rossi nucleati, è necessario un volume di campione inferiore. In tali casi, omettere il tampone di lisi dei globuli rossi 1x e aggiungerlo direttamente 400μLdi tampone reagente B e 20μL di RNasiA (10 mg/ml), mescolare accuratamente, e incubare a temperatura ambiente per 5 minuti.
2. Aggiungere 10μLRNasiA (10 mg/ml), 20μL Proteinasi K (10 mg/ml), mescolare accuratamente, digerire a 65 ℃ per 10 minuti. Durante questo periodo, capovolgere e mescolare 2-3 volte fino al completamento della digestione.
3. Aggiungere 200μLdi tampone reagente C al lisato, mescolare pipettando, aggiungere 200μL di etanolo anidro, mescolare pipettando.
4. Applicare il liquido ottenuto alla colonna di purificazione dell'estrazione del DNA (impostato) (circa 650~700μl ogni volta), centrifugare a 12,000 giri al minuto per 30 secondi, scartare i rifiuti raccolti, e reinserire la provetta di raccolta nella colonna di purificazione per l'estrazione del DNA (impostato) per il passo successivo.
5. Aggiungere 700μLdel tampone di rimozione dell'inibizione, centrifugare a 12,000 giri al minuto per 30 secondi, scartare i rifiuti.
6. Posizionare la colonna di purificazione per l'estrazione del DNA (impostato) in una nuova provetta di raccolta, aggiungere 500μLdi tampone di lavaggio 1, centrifugare a 12,000 giri al minuto per 30 secondi, scartare i rifiuti, e reinserire la colonna di purificazione per l'estrazione del DNA (impostato) nel tubo di raccolta per il passaggio successivo.
(Nota: Assicurarsi che l'etanolo anidro sia stato aggiunto al tampone di lavaggio 1.)
7. Ripeti il passaggio 6.
8. Posizionare la colonna di purificazione per l'estrazione del DNA (impostato) in una nuova provetta da centrifuga, scoprire, incubare a 65 ℃ a bagnomaria per 2 minuti. Estendere questo passaggio in modo appropriato per far evaporare l'etanolo il più possibile per evitare che i residui di etanolo influenzino gli esperimenti a valle.
9. Sospendere 50-100μLdi tampone di eluizione sulla membrana della colonna, centrifugare a 12,000 giri al minuto per 1 minuto, e raccogliere il DNA.
(Nota: 1. Eluizione del DNA con 50μL di tampone di eluizione può aumentare la concentrazione del DNA ma riduce la resa totale del DNA; 2. Il lavaggio del DNA eluito può essere riapplicato alla colonna di purificazione per l'estrazione del DNA. Centrifugare a 12,000 giri al minuto per 1 minuto ancora per aumentare la resa del DNAD.
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