血液基因組DNA萃取試劑盒

1. 試劑盒的組成

規格	50時間	100時間
貓. 不.	SN0219	SN0220
DNA萃取柱 (放)	50 (放)	100 (放)
試劑緩衝液B	20 毫升	2 × 20 毫升
試劑緩衝液C	30 毫升	2 ×30毫升
10×紅細胞裂解緩衝液	60 毫升	2 ×60毫升
洗滌緩衝液 1	15 毫升	2 × 15 毫升
洗脫緩衝液	20 毫升	20 毫升
蛋白酶K	1毫升	2x1毫升
rnasea	1毫升	2x1毫升
使用說明書	1	1

2. 貯存

該試劑盒應在室溫下保存 (15-25℃) 並且在乾燥條件下, 保存期限為 12 月. DNA 萃取純化柱可保存 1 在涼爽乾燥的環境中度過一年. 蛋白酶 K 和 核糖核酸酶A 含防腐劑, 允許在室溫下運輸, 但為了長期儲存, 應保存在-20℃.

3. 試劑盒使用說明

3.1 本試劑盒適用於分子生物學研究，不得用於疾病診斷或治療.

3.2 試劑盒中部分成分含有刺激物. 建議採取防護措施，例如穿著防護衣和護目鏡.

3.3 本試劑盒使用過程中, 高速離心機, 水浴 (金屬浴), 渦旋混合器, 無水乙醇, 無菌去離子水, 和EP管需用戶自備.

4. 試劑盒簡介

鮮血 DNA純化 試劑盒提供了一種快速有效的方法，用於從血液和其他體液中純化DNA. 通過用紅細胞裂解緩衝液裂解紅細胞, DNA可以有效地收集.

 

血液DNA快速純化套件可以從全血中提取總DNA (包括血液, 血清, 電漿, 和其他體液) 之內 30 分分鐘. 整個純化過程不需要有毒試劑，例如酚 - 氯仿. 萃取的DNA可直接用於 聚合酶鍊式反應, 南方印跡, 和其他應用.

5. 實驗原理和程序

6. 提取過程

開始實驗前:

A. 紅細胞裂解緩衝液1倍準備: 使用無RNase水稀釋10倍紅細胞裂解緩衝液至1倍體積.

乙. 試劑緩衝液B和試劑緩衝液C 可能在低溫下沉澱. 建議以65℃加熱 5 使用前幾分鐘溶解沉澱物.

C. 在使用之前 洗滌緩衝液 1, 如試劑瓶標籤上所示，添加指定量的無水乙醇, 並在標籤上標記檢查乙醇的標籤.

D. 洗脫緩衝液是 0.1x TE 解決方案 與最小的EDTA. EDTA是否可能影響後續實驗, 建議用無菌去離子水代替洗脫緩衝液.

1. 樣品處理: (收集 0.1-5 ML血液樣本)

A. 添加 2-3 次數 1X紅細胞裂解緩衝液血液或樣本 (使用前稀釋紅細胞裂解緩衝液10倍至1倍), 充分混合, 離心機在 12,000 轉速為 1 分分鐘, 小心地卸下上清液. 理論上的沉澱物應為白色或淺紅色. 將試劑緩衝液B添加到沉澱 (對於0.1-1ml血液樣本, 添加 200微升試劑緩衝液B; 1-2ML血液樣本, 添加 400微升 試劑緩衝液B).

乙. 如果處理來自家禽或鳥類有核紅細胞的鳥類的樣品, 需要較小的樣品體積. 在這種情況下, 省略1倍紅細胞裂解緩衝液並直接添加 400微升試劑緩衝液B和 20微升 rnasea (10 毫克/毫升), 充分混合, 並在室溫下孵育 5 分分鐘.

2. 添加 10微升rnasea (10 毫克/毫升), 20微升 蛋白酶K (10 毫克/毫升), 充分混合, 消化為65℃ 10 分分鐘. 在此期間, 反轉並混合 2-3 直到消化完成的時間.

3. 添加 200微升試劑緩衝液C 至裂解物, 通過移液混合, 添加 200微升 無水乙醇, 通過移液混合.

4. 將獲得的液體應用於DNA提取純度柱 (放) (每次約650~700μl), 離心機在 12,000 轉速為 30 秒, 丟棄收集的廢棄物, 並將收集管重新插入DNA提取純度柱中 (放) 下一步.

5. 添加 700微升抑製作用緩衝液, 離心機在 12,000 轉速為 30 秒, 丟棄廢棄物.

6. 放置DNA萃取純化管柱 (放) 在新系列管中, 添加 500微升洗滌緩衝液 1, 離心機在 12,000 轉速為 30 秒, 丟棄廢棄物, 並重新插入DNA萃取純化管柱 (放) 進入下一步的收集管.

(筆記: 確保已添加無水乙醇以洗滌緩衝液 1.)

7. 重複步驟 6.

8. 放置DNA萃取純化管柱 (放) 放入新的離心管中, 揭露, 在水浴中孵化65℃ 2 分分鐘. 適當擴展此步驟以盡可能蒸發乙醇，以防止乙醇殘基影響下游實驗.

9. 暫停 50-100微升洗脫緩衝液 到圓柱的膜上, 離心機在 12,000 轉速為 1 分分鐘, 並收集DNA.

(筆記: 1. 洗脫 DNA 50微升 洗脫緩衝液可以增加DNA濃度，但會降低總DNA產量; 2. 可以將洗脫的DNA洗滌重新塗在DNA提取純度柱上. 離心機在 12,000 轉速為 1 再次增加DNA yield.