1. Komponen kit reagen
| Spesifikasi | 50T | 100T |
| Kucing. TIDAK. | SN0219 | SN0220 |
| Kolom Ekstraksi DNA (mengatur) | 50 (mengatur) | 100 (mengatur) |
| Penyangga Reagen B | 20 ml | 2 × 20 ml |
| Buffer Reagen C | 30 ml | 2 × 30ml |
| 10×Buffer Lisis Sel Darah Merah | 60 ml | 2 × 60ml |
| Cuci Buffer 1 | 15 ml | 2 × 15 ml |
| Penyangga Elusi | 20 ml | 20 ml |
| Proteinase K | 1ml | 2x1ml |
| RNaseA | 1ml | 2x1ml |
| Instruksi manual | 1 | 1 |
2. Penyimpanan
Kit reagen ini harus disimpan pada suhu kamar (15-25℃) dan dalam kondisi kering, dengan umur simpan 12 bulan. Kolom pemurnian ekstraksi DNA dapat disimpan 1 tahun di lingkungan sejuk dan kering. Proteinase K dan RNase A mengandung bahan pengawet, memungkinkan transportasi pada suhu kamar, tapi untuk penyimpanan jangka panjang, mereka harus disimpan pada -20℃.
3. Petunjuk Penggunaan Kit Reagen
3.1 Kit reagen ini ditujukan untuk penelitian biologi molekuler dan tidak boleh digunakan untuk diagnosis atau pengobatan penyakit.
3.2 Beberapa komponen dalam kit reagen mengandung bahan iritan. Tindakan perlindungan seperti mengenakan pakaian pelindung dan kacamata direkomendasikan.
3.3 Selama penggunaan kit reagen ini, mesin sentrifugal berkecepatan tinggi, mandi air (mandi logam), pencampur pusaran, etanol anhidrat, air deionisasi steril, dan tabung EP perlu disiapkan oleh pengguna.
4. Pengantar Kit Reagen
Darah Pemurnian DNA Reagen Kit menawarkan metode yang cepat dan efektif untuk memurnikan DNA dari darah dan cairan tubuh lainnya. Dengan melisiskan sel darah merah dengan buffer lisis sel darah merah, DNA dapat dikumpulkan secara efisien.
Kit Pemurnian Cepat DNA Darah dapat mengekstraksi total DNA dari seluruh darah (termasuk darah, serum, plasma, dan cairan tubuh lainnya) di dalam 30 menit. Seluruh proses pemurnian tidak memerlukan reagen beracun seperti fenol-kloroform. DNA yang diekstraksi dapat langsung digunakan untuk PCR, Blot Selatan, dan aplikasi lainnya.
5. Prinsip dan Prosedur Eksperimental
6. Proses Ekstraksi
Sebelum Memulai Eksperimen:
A. Buffer Lisis Sel Darah Merah 1x Persiapan: Encerkan 10x Buffer Lisis Sel Darah Merah hingga 1x volume menggunakan air bebas RNase.
B. Reagen Buffer B dan Reagen Buffer C dapat mengendap pada suhu rendah. Disarankan untuk memanaskan pada suhu 65℃ untuk 5 menit untuk melarutkan endapan sebelum digunakan.
C. Sebelum menggunakan Cuci Buffer 1, tambahkan etanol anhidrat dalam jumlah tertentu seperti yang ditunjukkan pada label botol reagen, dan beri tanda centang pada label untuk menunjukkan penambahan etanol.
D. Buffer Elusi adalah a 0.1x solusi TE dengan EDTA minimal. Jika EDTA mungkin mempengaruhi percobaan selanjutnya, disarankan untuk mengganti Elution Buffer dengan air deionisasi steril.
- Penanganan Sampel: (Mengumpulkan 0.1-5 ml sampel darah)
A. Menambahkan 2-3 kali volumenya 1x Buffer Lisis Sel Darah Merahke darah atau sampel (Encerkan Buffer Lisis Sel Darah Merah 10x hingga 1x sebelum digunakan), aduk rata, sentrifugasi di 12,000 rpm untuk 1 menit, buang supernatannya dengan hati-hati. Secara teori, endapannya seharusnya berwarna putih atau merah pucat. Tambahkan Reagen Buffer B ke dalam endapan (untuk 0,1-1ml sampel darah, menambahkan 200μLPenyangga Reagen B; untuk 1-2ml sampel darah, menambahkan 400μL Penyangga Reagen B).
B. Jika menangani sampel dari organisme tingkat rendah seperti unggas atau burung dengan sel darah merah berinti, diperlukan volume sampel yang lebih kecil. Dalam kasus seperti itu, hilangkan 1x Buffer Lisis Sel Darah Merah dan langsung tambahkan 400μLdari Reagen Buffer B dan 20μL dari RNAseA (10 mg/ml), aduk rata, dan inkubasi pada suhu kamar selama 5 menit.
2. Menambahkan 10μLRNaseA (10 mg/ml), 20μL Proteinase K (10 mg/ml), aduk rata, dicerna pada suhu 65℃ untuk 10 menit. Selama periode ini, balikkan dan campur 2-3 kali sampai pencernaan selesai.
3. Menambahkan 200μLdari Reagen Buffer C ke lisat, campur dengan cara dipipet, menambahkan 200μL etanol anhidrat, campur dengan cara dipipet.
4. Oleskan cairan yang diperoleh ke kolom pemurnian ekstraksi DNA (mengatur) (sekitar 650~700μl setiap kali), sentrifugasi di 12,000 rpm untuk 30 detik, membuang sampah yang dikumpulkan, dan masukkan kembali tabung pengumpul ke dalam kolom pemurnian ekstraksi DNA (mengatur) untuk langkah selanjutnya.
5. Menambahkan 700μLbuffer penghilangan penghambatan, sentrifugasi di 12,000 rpm untuk 30 detik, membuang limbahnya.
6. Tempatkan kolom pemurnian ekstraksi DNA (mengatur) dalam tabung koleksi baru, menambahkan 500μLdari Pencucian Buffer 1, sentrifugasi di 12,000 rpm untuk 30 detik, membuang limbahnya, dan masukkan kembali kolom pemurnian ekstraksi DNA (mengatur) ke dalam tabung pengumpul untuk langkah selanjutnya.
(Catatan: Pastikan etanol anhidrat telah ditambahkan ke Wash Buffer 1.)
7. Ulangi langkah 6.
8. Tempatkan kolom pemurnian ekstraksi DNA (mengatur) ke dalam tabung centrifuge yang baru, menemukan, inkubasi pada suhu 65℃ dalam penangas air 2 menit. Perluas langkah ini dengan tepat untuk menguapkan etanol sebanyak mungkin guna mencegah residu etanol memengaruhi eksperimen hilir.
9. Menskors 50-100μLdari Elusi Buffer ke membran kolom, sentrifugasi di 12,000 rpm untuk 1 menit, dan mengumpulkan DNA-nya.
(Catatan: 1. Mengelusi DNA dengan 50μL Elution Buffer dapat meningkatkan konsentrasi DNA tetapi mengurangi hasil DNA total; 2. Pencucian DNA yang dielusi dapat diterapkan kembali ke kolom pemurnian ekstraksi DNA. Sentrifugasi di 12,000 rpm untuk 1 menit lagi untuk meningkatkan hasil DNAD.
Ulasan
Belum ada ulasan.