1. ส่วนประกอบของชุดรีเอเจนต์
| ข้อมูลจำเพาะ | 50ต | 100ต |
| แมว. เลขที่. | SN0219 | SN0220 |
| คอลัมน์สกัดดีเอ็นเอ (ชุด) | 50 (ชุด) | 100 (ชุด) |
| รีเอเจนต์บัฟเฟอร์ B | 20 มล | 2 × 20 มล |
| รีเอเจนต์บัฟเฟอร์ C | 30 มล | 2 × 30มล |
| 10×บัฟเฟอร์สลายเซลล์เม็ดเลือดแดง | 60 มล | 2 × 60มล |
| ล้างบัฟเฟอร์ 1 | 15 มล | 2 × 15 มล |
| บัฟเฟอร์การชะล้าง | 20 มล | 20 มล |
| โปรตีนเค | 1มล | 2x1มล |
| อาร์เนสเอ | 1มล | 2x1มล |
| คู่มือการใช้งาน | 1 | 1 |
2. พื้นที่จัดเก็บ
ชุดรีเอเจนต์นี้ควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง (15-25℃) และในสภาวะแห้ง, มีอายุการเก็บรักษาที่ 12 เดือน. คอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์จากการสกัด DNA สามารถเก็บไว้ได้ 1 ปีในสภาพแวดล้อมที่เย็นและแห้ง. โปรตีน K และ อาร์เนส เอ มีสารกันบูด, จึงสามารถขนส่งได้ที่อุณหภูมิห้อง, แต่สำหรับการจัดเก็บระยะยาว, ควรเก็บไว้ที่ -20 ℃.
3. คำแนะนำในการใช้ชุดรีเอเจนต์
3.1 ชุดรีเอเจนต์นี้มีไว้สำหรับการวิจัยอณูชีววิทยา และไม่ควรใช้สำหรับการวินิจฉัยหรือการรักษาโรค.
3.2 ส่วนประกอบบางอย่างในชุดรีเอเจนต์มีสารระคายเคือง. แนะนำให้ใช้มาตรการป้องกัน เช่น การสวมชุดป้องกันและแว่นตา.
3.3 ระหว่างการใช้งานชุดรีเอเจนต์นี้, เครื่องหมุนเหวี่ยงความเร็วสูง, อ่างอาบน้ำ (อาบน้ำโลหะ), เครื่องผสมน้ำวน, เอทานอลปราศจากน้ำ, น้ำปราศจากไอออนฆ่าเชื้อ, และผู้ใช้ต้องเตรียมท่อ EP.
4. ข้อมูลเบื้องต้นเกี่ยวกับชุดรีเอเจนต์
เลือด การทำให้บริสุทธิ์ของดีเอ็นเอ ชุดรีเอเจนต์นำเสนอวิธีการที่รวดเร็วและมีประสิทธิภาพในการทำให้ DNA บริสุทธิ์จากเลือดและของเหลวในร่างกายอื่นๆ. โดยการสลายเซลล์เม็ดเลือดแดงด้วยบัฟเฟอร์สลายเซลล์เม็ดเลือดแดง, สามารถรวบรวม DNA ได้อย่างมีประสิทธิภาพ.
ชุด Blood DNA Rapid Purification Kit สามารถสกัด DNA ทั้งหมดจากเลือดครบส่วนได้ (รวมทั้งเลือดด้วย, เซรั่ม, พลาสมา, และของเหลวในร่างกายอื่นๆ) ภายใน 30 นาที. กระบวนการทำให้บริสุทธิ์ทั้งหมดไม่จำเป็นต้องใช้รีเอเจนต์ที่เป็นพิษ เช่น ฟีนอล-คลอโรฟอร์ม. DNA ที่สกัดออกมาสามารถนำมาใช้ได้โดยตรง พีซีอาร์, การซับใต้, และแอพพลิเคชั่นอื่น ๆ.
5. หลักและวิธีการทดลอง
6. กระบวนการสกัด
ก่อนเริ่มการทดลอง:
ก. การเตรียมบัฟเฟอร์สลายเซลล์เม็ดเลือดแดง 1x: เจือจางบัฟเฟอร์สลายเซลล์เม็ดเลือดแดง 10 เท่าให้เป็นปริมาตร 1 เท่าโดยใช้น้ำที่ปราศจาก RNase.
บี. รีเอเจนต์บัฟเฟอร์ B และรีเอเจนต์บัฟเฟอร์ C อาจตกตะกอนที่อุณหภูมิต่ำ. แนะนำให้ตั้งอุณหภูมิ 65°C เป็นเวลา 5 นาทีเพื่อละลายตะกอนก่อนใช้งาน.
ค. ก่อนใช้งาน ล้างบัฟเฟอร์ 1, เติมเอทานอลแอนไฮดรัสตามจำนวนที่ระบุตามที่ระบุไว้บนฉลากขวดรีเอเจนต์, และทำเครื่องหมายบนฉลากเพื่อระบุการเติมเอทานอล.
ดี. บัฟเฟอร์การชะล้างคือ 0.1x โซลูชัน TE โดยมี EDTA น้อยที่สุด. หาก EDTA อาจส่งผลต่อการทดลองครั้งต่อไป, แนะนำให้เปลี่ยน Elution Buffer ด้วยน้ำปราศจากไอออนที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว.
- การจัดการตัวอย่าง: (เก็บรวบรวม 0.1-5 ตัวอย่างเลือด มล)
ก. เพิ่ม 2-3 คูณด้วยปริมาตรของ 1x บัฟเฟอร์สลายเซลล์เม็ดเลือดแดงไปยังเลือดหรือตัวอย่าง (เจือจางบัฟเฟอร์สลายเซลล์เม็ดเลือดแดง 10x ถึง 1x ก่อนใช้งาน), ผสมให้เข้ากัน, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาที, เอาส่วนเหนือตะกอนออกอย่างระมัดระวัง. ตามทฤษฎีแล้วตะกอนควรเป็นสีขาวหรือสีแดงซีด. เพิ่มรีเอเจนต์บัฟเฟอร์ B ลงในตะกอน (สำหรับตัวอย่างเลือด 0.1-1 มล, เพิ่ม 200ไมโครลิตรรีเอเจนต์บัฟเฟอร์ B; สำหรับตัวอย่างเลือด 1-2 มล, เพิ่ม 400ไมโครลิตร รีเอเจนต์บัฟเฟอร์ B).
บี. หากต้องจับกับตัวอย่างจากสิ่งมีชีวิตระดับต่ำ เช่น สัตว์ปีก หรือนกที่มีเซลล์เม็ดเลือดแดงที่มีนิวเคลียส, จำเป็นต้องใช้ตัวอย่างในปริมาณที่น้อยลง. ในกรณีเช่นนี้, ละเว้นบัฟเฟอร์สลายเซลล์เม็ดเลือดแดง 1x แล้วเติมเข้าไปโดยตรง 400ไมโครลิตรของรีเอเจนต์บัฟเฟอร์ B และ 20ไมโครลิตร ของ RNaseA (10 มก./มล), ผสมให้เข้ากัน, และฟักที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาที.
2. เพิ่ม 10ไมโครลิตรอาร์เนสเอ (10 มก./มล), 20ไมโครลิตร โปรตีนเค (10 มก./มล), ผสมให้เข้ากัน, ย่อยที่อุณหภูมิ 65 ℃เป็นเวลา 10 นาที. ในช่วงเวลานี้, พลิกกลับและผสม 2-3 ครั้งจนกว่าการย่อยจะเสร็จสมบูรณ์.
3. เพิ่ม 200ไมโครลิตรของรีเอเจนต์บัฟเฟอร์ C ถึงไลซีน, ผสมโดยการปิเปต, เพิ่ม 200ไมโครลิตร ของเอธานอลชนิดไม่มีน้ำ, ผสมโดยการปิเปต.
4. ใช้ของเหลวที่ได้รับกับคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์สำหรับการสกัด DNA (ชุด) (ประมาณ 650~700μl ในแต่ละครั้ง), เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 30 วินาที, ทิ้งขยะที่รวบรวมไว้, และใส่หลอดเก็บกลับเข้าไปในคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ของการสกัด DNA (ชุด) สำหรับขั้นตอนต่อไป.
5. เพิ่ม 700ไมโครลิตรของบัฟเฟอร์การกำจัดการยับยั้ง, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 30 วินาที, ทิ้งขยะ.
6. วางคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์สำหรับการสกัด DNA (ชุด) ในหลอดคอลเลกชันใหม่, เพิ่ม 500ไมโครลิตรของบัฟเฟอร์ล้าง 1, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 30 วินาที, ทิ้งขยะ, และใส่คอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์สำหรับการสกัด DNA อีกครั้ง (ชุด) ลงในท่อรวบรวมเพื่อขั้นตอนต่อไป.
(บันทึก: ตรวจสอบให้แน่ใจว่าได้เติมเอทานอลแบบแอนไฮดรัสลงใน Wash Buffer แล้ว 1.)
7. ทำซ้ำขั้นตอน 6.
8. วางคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์สำหรับการสกัด DNA (ชุด) ลงในหลอดหมุนเหวี่ยงใหม่, เปิดเผย, ฟักที่อุณหภูมิ 65°C ในอ่างน้ำเพื่อ 2 นาที. ขยายขั้นตอนนี้อย่างเหมาะสมเพื่อระเหยเอธานอลให้มากที่สุดเพื่อป้องกันไม่ให้เอธานอลตกค้างส่งผลกระทบต่อการทดลองขั้นปลายน้ำ.
9. ระงับ 50-100ไมโครลิตรของบัฟเฟอร์การชะล้าง ลงบนเมมเบรนของคอลัมน์, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาที, และรวบรวม DNA.
(บันทึก: 1. การชะล้าง DNA ด้วย 50ไมโครลิตร ของ Elution Buffer สามารถเพิ่มความเข้มข้นของ DNA ได้ แต่จะทำให้ปริมาณ DNA ทั้งหมดลดลง; 2. การชะล้าง DNA ที่ชะแล้วสามารถนำไปใช้กับคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ด้วยการสกัด DNA ได้. เครื่องปั่นแยกที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาทีอีกครั้งเพื่อเพิ่มปริมาณ DNAง.
รีวิว
ยังไม่มีบทวิจารณ์