บีซีเอ (กรดไบซินโคนิก) ชุดทดสอบโปรตีนเป็นวิธีการวัดค่าสีที่ใช้กันอย่างแพร่หลายสำหรับการวัดปริมาณความเข้มข้นของโปรตีนในตัวอย่าง. การทดสอบนี้อาศัยการลดไอออน Cu^2+ ไปเป็น Cu^1+ โดยโปรตีนภายใต้สภาวะที่เป็นด่าง, ก่อตัวเป็นสารเชิงซ้อนสีม่วงด้วยกรดไบซินโคนิก. ความเข้มของสีเป็นสัดส่วนโดยตรงกับความเข้มข้นของโปรตีน, ทำให้สามารถวัดปริมาณได้อย่างแม่นยำ.
นี่คือคำแนะนำทีละขั้นตอนเกี่ยวกับวิธีการใช้งาน บีซีเอ โปรตีน ชุดทดสอบ:
วัสดุที่จำเป็น:
- ชุดทดสอบโปรตีน BCA
- มาตรฐานโปรตีน (มักใช้เซรั่มอัลบูมินจากวัว)
- ตัวอย่างที่มีความเข้มข้นของโปรตีนที่ไม่ทราบ
- ไมโครเพลทหรือคิวเวตต์
- ไมโครปิเปตและทิป
- เครื่องอ่านไมโครเพลทหรือสเปกโตรโฟโตมิเตอร์
- น้ำกลั่น
ขั้นตอน:
- การจัดทำมาตรฐานโปรตีน:
- เตรียมชุดมาตรฐานโปรตีนพร้อมความเข้มข้นที่ทราบ. มาตรฐานเหล่านี้จะถูกใช้เพื่อสร้างเส้นโค้งมาตรฐานสำหรับการวัดปริมาณ. ความเข้มข้นทั่วไปได้แก่ 0, 0.125, 0.25, 0.5, 0.75, และ 1.0 มก./มล.
- การเตรียมตัวอย่าง:
- เจือตัวอย่างโปรตีนของคุณให้มีความเข้มข้นที่เหมาะสมภายในช่วงเชิงเส้นของการทดสอบ. หากมีความจำเป็น, คุณอาจต้องทำการเจือจางเบื้องต้นเพื่อให้แน่ใจว่าตัวอย่างจะอยู่ภายในเส้นโค้งมาตรฐาน.
- การเตรียมรีเอเจนต์การทำงาน BCA:
- ผสม BCA Reagent A และ BCA Reagent B ใน a 50:1 อัตราส่วน (โดยทั่วไปจะมีให้ในชุด). ตรวจสอบให้แน่ใจว่าได้ผสมอย่างทั่วถึง.
- การเพิ่มมาตรฐานและตัวอย่าง:
- ปิเปตแบ่งส่วนโปรตีนมาตรฐานและตัวอย่างลงในหลุมที่แยกจากกันของไมโครเพลท. แต่ละมาตรฐานและตัวอย่างควรทำซ้ำหรือเพิ่มเป็นสามเท่า.
- การเติมรีเอเจนต์การทำงาน BCA:
- เพิ่มปริมาตรที่เหมาะสมของ BCA Working Reagent ให้กับแต่ละหลุมที่มีสารมาตรฐานและตัวอย่าง. ผสมให้เข้ากัน.
- การฟักตัว:
- ฟักไมโครเพลทที่อุณหภูมิที่เหมาะสม (โดยทั่วไปคือ 37°C) สำหรับ 30 นาทีเพื่อให้ปฏิกิริยาสีเกิดขึ้น.
- การวัด:
- วัดค่าการดูดกลืนแสงของแต่ละหลุมได้ที่ 562 nm โดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลทหรือเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์.
- การสร้างเส้นโค้งมาตรฐาน:
- พล็อตค่าการดูดกลืนแสงของมาตรฐานเทียบกับความเข้มข้นที่ทราบเพื่อสร้างเส้นโค้งมาตรฐาน.
- ปริมาณตัวอย่าง:
- ใช้เส้นโค้งมาตรฐานเพื่อกำหนดความเข้มข้นของโปรตีนของตัวอย่างโดยพิจารณาจากค่าการดูดกลืนแสง.
- การวิเคราะห์ข้อมูล:
- คำนวณความเข้มข้นของโปรตีนในตัวอย่างตามเส้นโค้งมาตรฐาน. เครื่องอ่านไมโครเพลทส่วนใหญ่มีซอฟต์แวร์ที่สามารถช่วยในการวิเคราะห์นี้ได้.
ความคิดเห็นของลูกค้าเกี่ยวกับผลิตภัณฑ์ Solarbio สำหรับการอ้างอิง
รีวิว
ยังไม่มีบทวิจารณ์