BCA (비신 코닌산) 단백질 분석 키트는 샘플에서 단백질 농도의 정량화를위한 널리 활용 된 비색 방법이다. 이 분석은 알칼리 조건 하에서 단백질에 의해 Cu^2+ 이온의 Cu^1+로의 감소에 의존한다., 바이신 코닌산으로 자주색 복합체를 형성합니다. 색의 강도는 단백질 농도에 직접 비례합니다., 정확한 정량화 가능.
다음은 사용 방법에 대한 단계별 가이드입니다. BCA 단백질 분석 키트:
필요한 재료:
- BCA 단백질 분석 키트
- 단백질 표준 (소 혈청 알부민이 일반적으로 사용됩니다)
- 알려지지 않은 단백질 농도를 함유하는 샘플
- 마이크로 플레이트 또는 큐벳
- 마이크로 피펫 및 팁
- 마이크로플레이트 리더 또는 분광 광도계
- 증류수
절차:
- 단백질 표준의 준비:
- 알려진 농도로 일련의 단백질 표준을 준비하십시오. 이 표준은 정량화를위한 표준 곡선을 만드는 데 사용됩니다.. 일반적인 농도입니다 0, 0.125, 0.25, 0.5, 0.75, 그리고 1.0 mg/mL.
- 샘플 준비:
- 분석의 선형 범위 내에서 단백질 샘플을 적합한 농도로 희석하십시오.. 필요한 경우, 샘플이 표준 곡선에 속하는지 확인하기 위해 예비 희석을 수행해야 할 수도 있습니다..
- BCA 작업 시약의 준비:
- BCA 시약 A 및 BCA 시약 B를 a로 혼합하십시오. 50:1 비율 (일반적으로 키트에 제공됩니다). 철저한 믹싱을 보장하십시오.
- 표준 및 샘플 추가:
- 단백질 표준의 피펫 분취 량과 샘플을 마이크로 플레이트의 별도 우물로. 각 표준과 샘플은 중복 또는 3 회로 실행해야합니다..
- BCA 작업 시약의 추가:
- 각 우물이 포함 된 표준 및 샘플에 적절한 부피의 BCA 작업 시약 추가. 잘 섞어주세요.
- 잠복:
- 적절한 온도에서 마이크로 플레이트를 배양하십시오 (일반적으로 37 ° C) ~을 위한 30 색 반응이 발생하도록 시간.
- 측정:
- 각 우물의 흡광도를 측정하십시오 562 마이크로 플레이트 리더 또는 분광 광도계를 사용한 NM.
- 표준 곡선 생성:
- 표준 농도에 대한 표준의 흡광도 값을 표시하여 표준 곡선을 만듭니다..
- 샘플의 정량화:
- 표준 곡선을 사용하여 흡광도를 기준으로 샘플의 단백질 농도를 결정하십시오..
- 데이터 분석:
- 표준 곡선을 기반으로 샘플에서 단백질의 농도를 계산합니다.. 대부분의 마이크로 플레이트 리더에게는이 분석에 도움이되는 소프트웨어가 있습니다..
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