Голубиный цирковирус (ПиCV) Набор для тестирования нуклеиновых кислот

предмет номер：AP2308003 Спецификация：24Т/48Т Хранилище：-20℃

Внедрение продукции：

Голубиный цирковирус (ПиCV) является иммуносупрессивным патогеном и является одним из важных патогенных микроорганизмов, вызывающих синдром болезни голубей.. Он может ускорить репликацию в пролиферирующих клетках и клетках иммунной системы, приводя к низкому соотношению лимфоцитов, Снижение иммунитета, и повреждение иммунной системы голубя. Это может привести к вторичным инфекциям другими патогенами. Поэтому, рано, стремительный, и удобное обнаружение PICV имеет решающее значение для диагностики, замедление распространения заболевания, и предотвращение осложнений. Этот тестовый комплект разработан на основе консервативных последовательностей в гене PICV, с оптимизированными условиями, обеспечивая точные количественные флуоресцентные ПЦР тестирование орального, клоакальные мазки, кровь, и другие образцы тканей птиц. Это позволяет быстро определить, заражен ли хост PICV.

Содержание продукта：

Условия хранения：

Хранить при -20℃, срок годности не менее 12 месяцы.

Экспериментальная эксплуатация：

1. Базовые приготовления (Зона подготовки проб)

1.1 Образцы требований:

— Мазки из полости рта и клоаки: Возьмите стерильный ватный тампон., вставьте его в горло или клоаку птицы, повернуть три раза, поместите его в центрифужную пробирку, отрезать открытую часть, плотно закройте крышку, и пометить это. Образцы, которые можно быстро протестировать, следует хранить при температуре 2–8°C в течение 24 часы, и образцы, которые невозможно протестировать быстро, следует хранить при температуре -20°C..

— Цельная кровь: Используйте ЭДТА в качестве антикоагулянта., избегайте гепаринового антикоагулянта, используйте свежую цельную кровь, или хранить при температуре 2–8°C не более 7 дни, или хранить при температуре -20°C не более 3 месяцы, избегать повторных циклов замораживания-оттаивания.

— Салфетка: Возьмите свежую мышечную или органную ткань в количестве не более 100 мг., используйте 200-500 мкл стерильной воды для приготовления гомогената ткани, и приступаем к последующей подготовке проб.

1.2 Базовые приготовления:

Обратитесь к SanshiBio. «Набор для быстрого извлечения геномной ДНК животных (для ПЦР-анализа)» руководство (Каталог: ДП202), или другие наборы/методы для экстракции нуклеиновых кислот, отвечающие соответствующим требованиям., для экстракции нуклеиновых кислот из обработанных образцов. Поместите извлеченный образец нуклеиновой кислоты в холодильник и проверьте как можно скорее.. Хранить при температуре 4°C не более 7 суток или при температуре -20°С не более 6 месяцы.

2. Подготовка реакционной системы (Зона реакции)

2.1 Достаньте каждый компонент комплекта., полностью оттаять при комнатной температуре, центрифуга для 10 секунды, и центрифугируйте жидкость внутри стенки пробирки и крышки пробирки до дна пробирки.. Приготовьте реакционный раствор в соответствии с количеством образца. (п+2, где n — количество выборок, рекомендуется установить 1 положительный контроль и 1 отрицательный контроль для каждого эксперимента). Особый метод приготовления: Брать (п+2) реакционные трубки, содержащие раствор PICV Premix, добавьте в каждую пробирку по 11,5 мкл реакционного раствора PiHV., используйте пипетку, чтобы тщательно перемешать, 23мкл на лунку, и хранить в холодильнике.

2.2 Затем последовательно добавьте 2 мкл отрицательного контроля., выделенная нуклеиновая кислота образца, и PICV положительный контроль над реакционным раствором. Закройте крышку тюбика, сделать запись, а общий объем каждой реакции составляет 25 мкл.. Тщательно перемешать, центрифуга для 10 секунды, и проводить эксперименты по амплификации на приборе ПЦР.

3. ПЦР-амплификация (Область амплификации и анализа продуктов)

Предварительная денатурация при 95°C для 2 минуты; Денатурация при 95°C для 10 секунды, отжиг и удлинение при 60°C для 35 секунды, 40 циклы. Соберите сигналы флуоресценции при 60 ° C.. Выберите канал флуоресценции FAM. (использовать инструменты количественной флуоресцентной ПЦР в реальном времени, такие как серия ABI, если необходимо, обратитесь к производителю или добавьте корректирующий краситель ROX; в противном случае, следовать обычным процедурам).

4. Интерпретация результата

4.1 Условия достоверности эксперимента:

Значение Ct канала FAM положительного управления < 28 и «С»-наблюдается фигурная кривая усиления; отрицательный контроль не имеет значения Ct или значение Ct ≥ 38 и нет «С»-фигурная кривая усиления, эксперимент действителен. В противном случае, повторите эксперимент; если повторный эксперимент по-прежнему недействителен, обратитесь к техническому персоналу производителя.

4.2 Интерпретация результатов проб:

Значение Ct ≤ 33 и «С»-Кривая усиления формы указывает на PICV -положительный;

Значение Ct между 33 < Кт < 38 считается подозрительным, и рекомендуется пройти повторный тест. Если значение Ct повторного тестирования канала FAM < 33 после исключения аэрозольного загрязнения и наличия четкой кривой усиления, считается PICV позитивным, в противном случае считается отрицательным;

Нет значения Ct или значение Ct ≥ 38 и нет «С»-Кривая амплификации в форме указывает на PICV отрицательный.

Меры предосторожности：

• Чтобы предотвратить загрязнение, эксперимент должен быть строго разделен, и физическая изоляция между перегородками предпочтительна во избежание перекрестного загрязнения из-за человеческого фактора.. Во время эксперимента надевайте лабораторные халаты и латексные перчатки., использовать инструменты самостоятельно в разных областях, при необходимости меняйте перчатки и лабораторные халаты. После ПЦР, не открывайте крышку сразу; откройте его после достаточного охлаждения, чтобы свести к минимуму аэрозольное загрязнение..
• Полностью разморозьте реагенты перед использованием., но избегайте повторных циклов замораживания-оттаивания. В комплект входят пробирки для ПЦР-реакций емкостью 0,2 мл.; если нужна замена, перенос после полного оттаивания. Строго следуйте инструкциям по приготовлению реагентов и добавлению проб.. Рабочие станции, центрифуги, пипетки, и другие инструменты следует регулярно дезинфицировать хлорсодержащими дезинфицирующими средствами., алкоголь, средства обеззараживания нуклеиновых кислот, или УФ-свет.
• Отрицательный результат не обязательно означает, что хозяин не заражен вирусом.. Плохое качество образца, низкая вирусная нагрузка, или наличие сильных ингибирующих веществ (например, алкоголь, дезинфицирующие средства, антикоагулянты, и т. д.) может привести к неудачному извлечению нуклеиновой кислоты (обнаружение) и «отрицательный» результат. Следуйте критериям интерпретации результатов, и когда есть подозрительные результаты, сначала исключить аэрозольное загрязнение. Если есть другие вопросы, обратитесь к техническому персоналу производителя.
• Этот продукт предназначен только для одноразового использования. Компоненты реагента чувствительны к естественному свету.; избегать воздействия света во время упаковки и хранения. После упаковки, не замораживать-оттаивать повторно. Только для научных исследований; не для клинической диагностики или других целей.