Circovirus de la paloma (PiCV) Kit de prueba de ácido nucleico

Artículo No：AP2308003 Especificación：24t/48t Almacenamiento：-20℃

Introducción del producto：

Circovirus de la paloma (PiCV) es un patógeno inmunosupresor y es uno de los patógenos importantes que causan el síndrome. Puede acelerar la replicación en las células proliferantes y las células del sistema inmune, conduciendo a una baja relación linfocitos, disminución de la inmunidad, y daño al sistema inmunitario de paloma. Esto puede resultar en infecciones secundarias por otros patógenos. Por lo tanto, temprano, rápido, y la detección conveniente de PICV es crucial para el diagnóstico, ralentizar la propagación de la enfermedad, y prevenir complicaciones. Este kit de prueba está diseñado en base a las secuencias conservadas en el gen PICV, con condiciones optimizadas, habilitando cuantitativa fluorescente precisa PCR Prueba de oral, hisopos cloacales, sangre, y otras muestras de tejido de aves. Esto permite una determinación rápida de si el host está infectado con PICV.

Contenido del producto：

Condiciones de almacenaje：

Almacenar a -20 ℃, la vida útil es al menos 12 meses.

Operación experimental：

1. Preparación de la muestra (Área de preparación de muestras)

1.1 Requisitos de muestra:

– Hisopos orales y cloacales: Tome un hisopo de algodón esterilizado., insértelo en la garganta o cloaca del pájaro, girar tres veces, colóquelo en un tubo de centrífuga, cortar la parte expuesta, cerrar bien la tapa, y etiquetarlo. Las muestras que puedan analizarse rápidamente deben almacenarse entre 2 y 8 °C dentro de un plazo 24 horas, y las muestras que no puedan analizarse rápidamente deben almacenarse a -20°C.

– Sangre pura: Utilice EDTA como anticoagulante., evitar el anticoagulante heparina, usar sangre entera fresca, o almacenar a 2-8°C por no más de 7 días, o almacenar a -20°C por no más de 3 meses, evitando ciclos repetidos de congelación y descongelación.

– Tejido: Tome tejido muscular o de órganos fresco que no exceda los 100 mg., Utilice 200-500 μl de agua estéril para preparar el homogeneizado de tejido., y continuar con la preparación posterior de la muestra.

1.2 Preparación de la muestra:

Consulte la biografía de Sanshi. “Kit de extracción rápida de ADN genómico animal (para análisis por PCR)” manual (Catalogar: DP202), u otros kits/métodos de extracción de ácidos nucleicos que cumplan los requisitos pertinentes, para la extracción de ácidos nucleicos de muestras procesadas. Coloque la muestra de ácido nucleico extraída en una hielera y pruebe lo antes posible.. Almacenar a 4°C por no más de 7 días o a -20°C durante no más de 6 meses.

2. Preparación del sistema de reacción (Área de reacción)

2.1 Saca cada componente del kit., descongelar completamente a temperatura ambiente, centrífuga para 10 segundos, y centrifugar el líquido dentro de la pared del tubo y la tapa del tubo hasta el fondo del tubo.. Prepare la solución de reacción de acuerdo con la cantidad de muestra. (n+2, donde n es el número de muestras, se recomienda configurar 1 control positivo y 1 control negativo para cada experimento). Método de preparación específico: Llevar (n+2) Tubos de reacción que contienen solución PICV premix, agregue 11,5 µl de solución de reacción de PiHV a cada tubo, use una pipeta para mezclar bien, 23µL por pocillo, y guardar en una hielera.

2.2 Luego agregue secuencialmente 2 μL de control negativo., ácido nucleico de muestra extraída, y control positivo PICV a la solución de reacción. Cerrar la tapa del tubo, grabar un disco, y el volumen total de cada reacción es 25μL. Mezclar bien, centrífuga para 10 segundos, y realizar experimentos de amplificación en el instrumento de PCR.

3. Amplificación por PCR (Área de Amplificación y Análisis de Productos)

Predesnaturalización a 95°C para 2 minutos; Desnaturalización a 95°C para 10 segundos, recocido y extensión a 60°C para 35 segundos, 40 ciclos. Recoge señales de fluorescencia a 60 °C.. Elija el canal de fluorescencia FAM (Utilice instrumentos de PCR cuantitativa de fluorescencia en tiempo real, como la serie ABI., si necesario, póngase en contacto con el fabricante o agregue tinte corrector ROX; de lo contrario, seguir los procedimientos normales).

4. Interpretación de resultados

4.1 Condiciones para la validez del experimento:

Valor Ct del canal FAM de control positivo < 28 y un “S”-Se observa una curva de amplificación formada.; el control negativo no tiene valor Ct o valor Ct ≥ 38 y no “S”-curva de amplificación en forma, el experimento es valido. De lo contrario, repetir el experimento; si la repetición del experimento aún no es válida, contactar con el personal técnico del fabricante.

4.2 Interpretación de los resultados de las muestras:

Valor CT ≤ 33 y un “S”-La curva de amplificación con forma indica PICV Positive;

Valor Ct entre 33 < Connecticut < 38 se considera sospechoso, y se recomienda volver a realizar la prueba. Si el valor Ct de nueva prueba del canal FAM es < 33 después de excluir la contaminación por aerosoles y hay una curva de amplificación clara, Se considera PICV Positivo, de lo contrario se considera negativo;

Sin valor Ct o valor Ct ≥ 38 y no “S”-La curva de amplificación con forma indica PICV negativo.

Precauciones：

• Para prevenir la contaminación, el experimento debe estar estrictamente dividido, y se prefiere el aislamiento físico entre particiones para evitar la contaminación cruzada debido a factores humanos. Use batas de laboratorio y guantes de látex durante el experimento., utilizar herramientas de forma independiente en diferentes áreas, cambiarse guantes y batas de laboratorio cuando sea necesario. Después de la PCR, no abra la tapa inmediatamente; Ábralo después de enfriarlo lo suficiente para minimizar la contaminación por aerosoles..
• Descongelar completamente los reactivos antes de su uso., pero evite ciclos repetidos de congelación y descongelación.. Los tubos de reacción de PCR incluidos en el kit son de 0,2 ml.; si es necesario un reemplazo, transferir después de la descongelación completa. Siga estrictamente las instrucciones para la preparación de reactivos y la adición de muestras.. Estaciones de trabajo, centrífugas, pipetas, y otros instrumentos deben desinfectarse periódicamente con desinfectantes que contengan cloro, alcohol, agentes de descontaminación de ácidos nucleicos, o luz ultravioleta.
• Un resultado negativo no significa necesariamente que el huésped no esté infectado con el virus.. Mala calidad de la muestra, baja carga de virus, o la presencia de sustancias inhibidoras fuertes (como el alcohol, desinfectantes, anticoagulantes, etc.) puede resultar en una extracción fallida de ácido nucleico (detección) y un “negativo” resultado. Seguir los criterios de interpretación de resultados., y cuando hay resultados sospechosos, primero excluir la contaminación por aerosoles. Si hay otras preguntas, contactar con el personal técnico del fabricante.
• Este producto es para un solo uso.. Los componentes del reactivo son sensibles a la luz natural.; Evite la exposición a la luz durante el embalaje y almacenamiento.. Después del embalaje, no congelar y descongelar repetidamente. Sólo para uso en investigación científica.; no para diagnóstico clínico u otros fines.