หมายเลขสินค้า：AP2308003 ข้อมูลจำเพาะ：24ที/48ต พื้นที่จัดเก็บ：-20℃
การแนะนำสินค้า：
นกพิราบ Circovirus (PiCV) เป็นเชื้อก่อโรคกดภูมิคุ้มกันและเป็นหนึ่งในเชื้อก่อโรคที่สำคัญที่ทำให้เกิดโรคนกพิราบสควอบ. สามารถเร่งการจำลองแบบในเซลล์ที่เพิ่มจำนวนและเซลล์ระบบภูมิคุ้มกัน, ส่งผลให้อัตราส่วนเม็ดเลือดขาวต่ำ, ภูมิคุ้มกันลดลง, และทำลายระบบภูมิคุ้มกันของนกพิราบ. ซึ่งอาจส่งผลให้เกิดการติดเชื้อทุติยภูมิจากเชื้อโรคอื่นๆ. ดังนั้น, แต่แรก, รวดเร็ว, และการตรวจหา PiCV ที่สะดวกเป็นสิ่งสำคัญสำหรับการวินิจฉัย, ชะลอการแพร่กระจายของโรค, และป้องกันภาวะแทรกซ้อน. ชุดทดสอบนี้ได้รับการออกแบบตามลำดับการอนุรักษ์ในยีน PiCV, ด้วยเงื่อนไขที่เหมาะสมที่สุด, ช่วยให้สามารถวัดปริมาณฟลูออเรสเซนต์ได้อย่างแม่นยำ พีซีอาร์ การทดสอบช่องปาก, ไม้กวาดปิดบัง, เลือด, และตัวอย่างเนื้อเยื่ออื่นๆ จากนก. ซึ่งช่วยให้ระบุได้อย่างรวดเร็วว่าโฮสต์ติดไวรัส PiCV หรือไม่.
เนื้อหาผลิตภัณฑ์：
| ส่วนประกอบรีเอเจนต์ | AP2308003-01(24T) | AP2308003-02(48T) |
| โซลูชัน PiCV พรีมิกซ์ | 11.5µL/หลุม× 8 หลุม/แถบ× 3 แถบ | 11.5µL/หลุม× 8 หลุม/แถบ× 6 แถบ |
| โซลูชันปฏิกิริยา PiCV | 290ไมโครลิตร | 575ไมโครลิตร |
| PiCV การควบคุมเชิงบวก | 100ไมโครลิตร | 100ไมโครลิตร |
| การควบคุมเชิงลบ | 100ไมโครลิตร | 100ไมโครลิตร |
สภาพการเก็บรักษา：
เก็บที่อุณหภูมิ -20 ℃, อายุการเก็บรักษาเป็นอย่างน้อย 12 เดือน.
การดำเนินการทดลอง：
-
การจัดเตรียมตัวอย่าง (พื้นที่เตรียมตัวอย่าง)
1.1 ข้อกำหนดตัวอย่าง:
– ไม้กวาดในช่องปากและในช่องปาก: ใช้สำลีปลอดเชื้อ, สอดเข้าไปในลำคอของนกหรือเสื้อคลุม, หมุนสามครั้ง, วางไว้ในหลอดหมุนเหวี่ยง, ตัดส่วนที่สัมผัสออก, ปิดฝาให้แน่น, และติดป้ายกำกับ. ตัวอย่างที่สามารถทดสอบได้ทันทีควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 2-8°C ภายใน 24 ชั่วโมง, และตัวอย่างที่ไม่สามารถทดสอบได้ทันทีควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20°C.
– เลือดทั้งหมด: ใช้ EDTA เป็นสารกันเลือดแข็ง, หลีกเลี่ยงสารกันเลือดแข็งเฮปาริน, ใช้เลือดสดทั้งหมด, หรือเก็บที่อุณหภูมิ 2-8°C ไม่เกิน 7 วัน, หรือเก็บที่อุณหภูมิ -20°C ไม่เกิน 3 เดือน, หลีกเลี่ยงการแช่แข็งและละลายซ้ำๆ.
– เนื้อเยื่อ: รับประทานกล้ามเนื้อหรือเนื้อเยื่อสดไม่เกิน 100 มก, ใช้น้ำฆ่าเชื้อ200-500μLเพื่อเตรียมเนื้อเยื่อให้เป็นเนื้อเดียวกัน, และดำเนินการเตรียมตัวอย่างต่อไป.
1.2 การจัดเตรียมตัวอย่าง:
อ้างถึง SanshiBio “ชุดสกัด DNA อย่างรวดเร็วของจีโนมสัตว์ (สำหรับการวิเคราะห์ PCR)” คู่มือ (แคตตาล็อก: DP202), หรือชุด/วิธีการสกัดกรดนิวคลีอิกอื่นๆ ที่ตรงตามข้อกำหนดที่เกี่ยวข้อง, สำหรับการสกัดกรดนิวคลีอิกจากตัวอย่างที่ผ่านการแปรรูป. วางกรดนิวคลีอิกตัวอย่างที่สกัดแล้วไว้ในตู้เย็นและทำการทดสอบโดยเร็วที่สุด. เก็บที่อุณหภูมิ 4°C ไม่เกิน 7 วันหรือที่อุณหภูมิ -20°C ไม่เกิน 6 เดือน.
-
การเตรียมระบบปฏิกิริยา (พื้นที่ปฏิกิริยา)
2.1 นำส่วนประกอบแต่ละส่วนของชุดออกมา, ละลายอย่างสมบูรณ์ที่อุณหภูมิห้อง, เครื่องหมุนเหวี่ยงสำหรับ 10 วินาที, และปั่นแยกของเหลวภายในผนังท่อและฝาท่อไปที่ด้านล่างของท่อ. เตรียมสารละลายสำหรับปฏิกิริยาตามปริมาณตัวอย่าง (n+2, โดยที่ n คือจำนวนตัวอย่าง, ขอแนะนำให้ตั้งค่า 1 การควบคุมเชิงบวกและ 1 การควบคุมเชิงลบสำหรับการทดสอบแต่ละครั้ง). วิธีการเตรียมเฉพาะ: เอา (n+2) หลอดปฏิกิริยาที่มีสารละลายพรีมิกซ์ PiCV, เติมสารละลายปฏิกิริยา PiHV 11.5µL ลงในแต่ละหลอด, ใช้ปิเปตเพื่อผสมให้ละเอียด, 23µL ต่อหลุม, และเก็บในตู้เย็น.
2.2 จากนั้นเพิ่มตัวควบคุมเชิงลบ 2μL ตามลำดับ, ตัวอย่างกรดนิวคลีอิกที่สกัดได้, และการควบคุมเชิงบวกของ PiCV ต่อสารละลายปฏิกิริยา. ปิดฝาท่อ, ทำบันทึก, และปริมาตรรวมของแต่ละปฏิกิริยาคือ 25ไมโครลิตร. ผสมให้เข้ากัน, เครื่องหมุนเหวี่ยงสำหรับ 10 วินาที, และทำการทดลองขยายสัญญาณด้วยเครื่องมือ PCR.
-
การขยาย PCR (พื้นที่การขยายและการวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์)
การเสียสภาพล่วงหน้าที่ 95°C สำหรับ 2 นาที; การเสียสภาพที่ 95°C สำหรับ 10 วินาที, การหลอมและยืดที่อุณหภูมิ 60°C สำหรับ 35 วินาที, 40 รอบ. เก็บสัญญาณเรืองแสงที่อุณหภูมิ 60°C. เลือกช่องเรืองแสง FAM (ใช้เครื่องมือ PCR เชิงปริมาณเรืองแสงแบบเรียลไทม์ เช่น ซีรี่ส์ ABI, ในกรณีที่จำเป็น, ติดต่อผู้ผลิตหรือเพิ่มสีย้อมสำหรับแก้ไข ROX; มิฉะนั้น, ปฏิบัติตามขั้นตอนปกติ).
-
การตีความผลลัพธ์
4.1 เงื่อนไขสำหรับความถูกต้องของการทดสอบ:
การควบคุมเชิงบวก ค่า Ct ของช่อง FAM < 28 และก “ส”-สังเกตเส้นโค้งการขยายรูปทรง; การควบคุมเชิงลบไม่มีค่า Ct หรือค่า Ct ≥ 38 และไม่ “ส”-เส้นโค้งการขยายรูปทรง, การทดลองนั้นถูกต้อง. มิฉะนั้น, ทำการทดลองซ้ำ; หากการทดสอบซ้ำยังคงไม่ถูกต้อง, ติดต่อเจ้าหน้าที่ด้านเทคนิคของผู้ผลิต.
4.2 การตีความผลลัพธ์ตัวอย่าง:
ค่ากะรัต ≤ 33 และ “ส”-เส้นโค้งการขยายรูปทรงบ่งชี้ PiCV เป็นบวก;
ค่ากะรัตระหว่าง 33 < กะรัต < 38 ถือว่าน่าสงสัย, และแนะนำให้ทำการทดสอบซ้ำ. หากช่อง FAM ทดสอบค่า Ct อีกครั้ง < 33 หลังจากไม่รวมการปนเปื้อนของละอองลอยและมีเส้นโค้งการขยายที่ชัดเจน, ถือว่า PiCV เป็นบวก, มิฉะนั้นจะถือว่าเป็นเชิงลบ;
ไม่มีค่า Ct หรือค่า Ct ≥ 38 และไม่ “ส”-เส้นโค้งการขยายรูปทรงบ่งชี้ PiCV เป็นลบ.
ข้อควรระวัง：
- เพื่อป้องกันการปนเปื้อน, การทดลองควรแบ่งพาร์ติชันอย่างเคร่งครัด, และการแยกทางกายภาพระหว่างพาร์ติชันเป็นที่ต้องการเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนข้ามเนื่องจากปัจจัยของมนุษย์. สวมเสื้อกาวน์แล็บและถุงมือยางในระหว่างการทดลอง, ใช้เครื่องมืออย่างอิสระในด้านต่างๆ, เปลี่ยนถุงมือและเสื้อกาวน์ห้องปฏิบัติการเมื่อจำเป็น. หลังจาก PCR, อย่าเปิดฝาทันที; เปิดหลังจากเย็นเพียงพอแล้วเพื่อลดการปนเปื้อนของละอองลอย.
- ละลายรีเอเจนต์ให้หมดก่อนใช้งาน, แต่หลีกเลี่ยงการแช่แข็ง-ละลายซ้ำๆ. หลอดปฏิกิริยา PCR ที่ให้มาในชุดคือ 0.2 มล; หากจำเป็นต้องเปลี่ยน, ถ่ายโอนหลังจากการละลายเสร็จสมบูรณ์. ปฏิบัติตามคำแนะนำในการเตรียมรีเอเจนต์และการเติมตัวอย่างอย่างเคร่งครัด. เวิร์กสเตชัน, เครื่องหมุนเหวี่ยง, ปิเปต, และอุปกรณ์อื่นๆ ควรฆ่าเชื้อด้วยน้ำยาฆ่าเชื้อที่มีคลอรีนเป็นประจำ, แอลกอฮอล์, สารชำระล้างกรดนิวคลีอิก, หรือแสงยูวี.
- ผลลัพธ์ที่เป็นลบไม่ได้หมายความว่าโฮสต์ไม่ได้ติดไวรัสเสมอไป. ตัวอย่างมีคุณภาพต่ำ, โหลดไวรัสต่ำ, หรือมีสารยับยั้งอย่างแรง (เช่นแอลกอฮอล์, ยาฆ่าเชื้อ, สารกันเลือดแข็ง, ฯลฯ) อาจส่งผลให้สกัดกรดนิวคลีอิกไม่สำเร็จ (การตรวจจับ) และก “เชิงลบ” ผลลัพธ์. ปฏิบัติตามเกณฑ์การตีความผลลัพธ์, และเมื่อมีผลลัพธ์ที่น่าสงสัย, อันดับแรก ไม่รวมการปนเปื้อนของละอองลอย. หากมีคำถามอื่นๆ, ติดต่อเจ้าหน้าที่ด้านเทคนิคของผู้ผลิต.
- ผลิตภัณฑ์นี้ใช้เพียงครั้งเดียวเท่านั้น. ส่วนประกอบในรีเอเจนต์ไวต่อแสงธรรมชาติ; หลีกเลี่ยงการสัมผัสแสงระหว่างการบรรจุและการเก็บรักษา. หลังจากบรรจุภัณฑ์, อย่าแช่แข็ง-ละลายซ้ำๆ. สำหรับใช้ในการวิจัยทางวิทยาศาสตร์เท่านั้น; ไม่ใช่เพื่อการวินิจฉัยทางคลินิกหรือเพื่อวัตถุประสงค์อื่น.
รีวิว
ยังไม่มีบทวิจารณ์