Golub ciklovirus (Picv) Kit za testiranje nukleinske kiseline

Stavka br：AP2308003 Specifikacija：24T/48T Skladištenje：-20℃

Predstavljanje proizvoda：

Golub ciklovirus (Picv) is an immunosuppressive pathogen and is one of the important pathogens causing pigeon squab disease syndrome. It can accelerate replication in proliferating cells and immune system cells, leading to a low lymphocyte ratio, decreased immunity, and damage to the pigeon immune system. This can result in secondary infections by other pathogens. Stoga, early, brza, and convenient detection of PiCV is crucial for diagnosis, Usporavanje širenja bolesti, i sprječavanje komplikacija. This test kit is designed based on the conserved sequences in the PiCV gene, with optimized conditions, enabling accurate fluorescent quantitative PCR testing of oral, cloacal swabs, krv, i drugih uzoraka tkiva ptica. This allows for a quick determination of whether the host is infected with PiCV.

Sadržaj proizvoda：

Uvjeti skladištenja：

Čuvati na -20℃, rok trajanja je najmanje 12 mjeseca.

Eksperimentalni rad：

1. Priprema uzorka (Prostor za pripremu uzorka)

1.1 Zahtjevi za uzorke:

– Oralni i kloakalni brisevi: Uzmite sterilnu vatu, umetnite ga u grlo ptice ili kloaku, okrenite tri puta, stavite u epruvetu za centrifugu, odrežite izloženi dio, čvrsto zatvorite čep, i označite ga. Uzorke koji se mogu odmah testirati treba pohraniti na 2-8°C unutar 24 sati, a uzorke koji se ne mogu odmah testirati treba pohraniti na -20°C.

– Puna krv: Koristite EDTA kao antikoagulans, izbjegavati heparin antikoagulans, koristite svježu punu krv, ili čuvati na 2-8°C ne dulje od 7 dana, ili čuvati na -20°C ne dulje od 3 mjeseca, izbjegavanje ponovljenih ciklusa smrzavanja i odmrzavanja.

– Tkivo: Uzmite svježe mišićno ili organsko tkivo koje ne prelazi 100 mg, koristite 200-500 μL sterilne vode za pripremu homogenata tkiva, i nastaviti s naknadnom pripremom uzorka.

1.2 Priprema uzorka:

Pogledajte SanshiBio “Komplet za brzu ekstrakciju životinjske genomske DNK (za PCR analizu)” priručnik (Katalog: DP202), ili druge komplete/metode za ekstrakciju nukleinskih kiselina koje ispunjavaju relevantne zahtjeve, za ekstrakciju nukleinskih kiselina iz obrađenih uzoraka. Stavite ekstrahirani uzorak nukleinske kiseline u hladnjak i testirajte što je prije moguće. Čuvati na 4°C ne duže od 7 dana ili na -20°C ne više od 6 mjeseca.

2. Priprema sustava za reakciju (Područje reakcije)

2.1 Izvadite svaku komponentu kompleta, potpuno otopiti na sobnoj temperaturi, centrifuga za 10 sekundi, i centrifugirajte tekućinu unutar stijenke epruvete i poklopca epruvete do dna epruvete. Pripremite reakcijsku otopinu prema količini uzorka (n+2, gdje je n broj uzoraka, preporuča se postaviti 1 pozitivna kontrola i 1 negativna kontrola za svaki eksperiment). Specifična metoda pripreme: uzeti (n+2) reaction tubes containing PiCV premix solution, dodajte 11,5 µL PiHV reakcijske otopine u svaku epruvetu, upotrijebite pipetu za temeljito miješanje, 23µL po jažici, i čuvati u hladnjaku.

2.2 Zatim uzastopno dodajte 2 μL negativne kontrole, ekstrahirani uzorak nukleinske kiseline, and PiCV positive control to the reaction solution. Zatvorite čep tube, napraviti zapisnik, a ukupni volumen svake reakcije je 25μL. Temeljito promiješajte, centrifuga za 10 sekundi, te izvoditi pokuse amplifikacije na PCR instrumentu.

3. PCR amplifikacija (Područje pojačanja i analize proizvoda)

Preddenaturacija na 95°C za 2 minuta; Denaturacija na 95°C za 10 sekundi, žarenja i istezanja na 60°C za 35 sekundi, 40 ciklusi. Prikupite fluorescentne signale na 60°C. Odaberite FAM fluorescentni kanal (koristiti kvantitativne PCR instrumente fluorescencije u stvarnom vremenu kao što je serija ABI, ako je potrebno, obratite se proizvođaču ili dodajte ROX korekcijsku boju; inače, slijedite normalne postupke).

4. Tumačenje rezultata

4.1 Uvjeti za valjanost eksperimenta:

Vrijednost Ct kanala pozitivne kontrole FAM < 28 i a “S”-promatra se oblikovana krivulja pojačanja; negativna kontrola nema Ct vrijednost ili Ct vrijednost ≥ 38 i br “S”-oblikovana krivulja pojačanja, pokus je valjan. Inače, ponovite eksperiment; ako je ponovljeni eksperiment još uvijek nevažeći, obratite se tehničkom osoblju proizvođača.

4.2 Tumačenje rezultata uzorka:

Ct vrijednost ≤ 33 i an “S”-shaped amplification curve indicate PiCV positive;

Ct vrijednost između 33 < Ct < 38 smatra se sumnjivim, te se preporučuje ponovno testiranje. Ako je vrijednost Ct ponovnog testiranja FAM kanala < 33 nakon isključivanja kontaminacije aerosolom i postoji jasna krivulja pojačanja, it is considered PiCV positive, inače smatra negativnim;

Nema Ct vrijednosti ili Ct vrijednost ≥ 38 i br “S”-shaped amplification curve indicate PiCV negative.

Mjere predostrožnosti：

• Za sprječavanje kontaminacije, eksperiment treba biti strogo podijeljen, a poželjna je fizička izolacija između pregrada kako bi se izbjegla unakrsna kontaminacija uzrokovana ljudskim čimbenicima. Tijekom eksperimenta nosite laboratorijske kute i rukavice od lateksa, samostalno koristiti alate u različitim područjima, promijenite rukavice i laboratorijske kute kada je to potrebno. Nakon PCR-a, nemojte odmah otvarati poklopac; otvorite ga nakon dovoljnog hlađenja kako biste smanjili kontaminaciju aerosolom.
• Prije upotrebe potpuno otopite reagense, ali izbjegavajte ponavljane cikluse smrzavanja i odmrzavanja. PCR reakcijske epruvete koje se nalaze u kompletu su od 0,2 ml; ako je potrebna zamjena, prijenos nakon potpunog odmrzavanja. Strogo slijedite upute za pripremu reagensa i dodavanje uzorka. Radne stanice, centrifuge, pipete, a ostale instrumente treba redovito dezinficirati dezinficijensima koji sadrže klor, alkohol, sredstva za dekontaminaciju nukleinske kiseline, ili UV svjetlo.
• Negativan rezultat ne znači nužno da domaćin nije zaražen virusom. Loša kvaliteta uzorka, nisko opterećenje virusima, ili prisutnost jakih inhibitornih tvari (kao što su alkohol, dezinfekcijska sredstva, antikoagulansi, itd.) može rezultirati neuspješnom ekstrakcijom nukleinske kiseline (otkrivanje) i a “negativan” proizlaziti. Slijedite kriterije tumačenja rezultata, a kada postoje sumnjivi rezultati, prvo isključite kontaminaciju aerosolom. Ako ima još pitanja, obratite se tehničkom osoblju proizvođača.
• Ovaj proizvod je samo za jednokratnu upotrebu. Komponente u reagensu osjetljive su na prirodno svjetlo; izbjegavajte izlaganje svjetlosti tijekom pakiranja i skladištenja. Nakon pakiranja, nemojte opetovano zamrzavati-otapati. Samo za znanstvena istraživanja; ne za kliničku dijagnozu ili druge svrhe.