Бактериальная тотальная РНК (плюс) Комплект для извлечения

1. Компоненты набора реагентов

Технические характеристики	50Т	100Т
Кот. Нет.	SN0321-Д	СН0322-Д
Колонки для экстракции РНК (набор)	50(набор)	100(набор)
Колонки для очистки ДНК (набор)	50(набор)	100(набор)
Экстракция РНК Буфер I	30мл	2× 30 мл
Буфер удаления ингибитора	30мл	2×30 мл
Промывной буфер 1	15 мл	2×15 мл
Элюирующий буфер	20мл	2×20 мл
Лизоцим	5мл	2х5мл
Инструкция по эксплуатации	1	1

2. Хранилище

Этот набор реагентов следует хранить при комнатной температуре. (15-25℃) в сухой среде и может храниться в течение 12 месяцы. Лизоцим содержит консервант., возможность транспортировки при комнатной температуре; однако, для длительного хранения, его следует хранить при -20 ℃

3. Инструкции по использованию набора реагентов

3.1 Этот набор предназначен для исследовательских целей в области молекулярной биологии и не должен использоваться для диагностики или лечения заболеваний..

3.2 Некоторые компоненты набора содержат раздражители.; желательно принять необходимые меры предосторожности (например, носить защитную одежду и очки).

3.3 Для использования этого комплекта требуется дополнительное оборудование, такое как высокоскоростная центрифуга., водяная баня (металлическая ванна), вихревой смеситель, безводный этанол, жидкий азот, хлороформ, стерильная деионизированная вода, и EP трубки.

4. Знакомство с набором реагентов

Этот набор для очистки РНК обеспечивает быстрое и эффективное решение для очистки бактериальной РНК., подходит для большинства бактериальных тканей. В наборе используется технология удаления ДНК для эффективного удаления геномной ДНК., и полученные образцы РНК обычно не требуют расщепления на колонке., снижение риска деградации РНК.

Набор для быстрой очистки РНК позволяет экстрагировать полную бактериальную РНК. (включая ядерную РНК и цитоплазматическую РНК) в пределах 1 час. Экстрагированную РНК можно напрямую использовать для RT.-ПЦР, Нозерн-блоттинг, и т. д.. Весь процесс очистки не требует использования токсичных реагентов, таких как фенол-хлороформ., что делает набор для очистки РНК подходящим для различных типов образцов.

5. Экспериментальные принципы и процедуры

6. Процесс экстракции

Меры предосторожности перед началом эксперимента:

А. Перед использованием, добавьте указанное количество абсолютного этанола в Промывной буфер 1 как указано на этикетке флакона с реагентом., и отметьте галочкой, что указано добавление абсолютного этанола.

Б. Элюирующий буфер представляет собой 0.1х ТЕ решение содержащий минимальное количество ЭДТА. Если ЭДТА может повлиять на последующие эксперименты, рекомендуется заменить элюционный буфер стерильной деионизированной водой..

1. Образец обработки:

А. Грамположительные бактерии: Центрифугируйте бактериальную суспензию при 4 ℃., 12,000 об/мин для 2 минуты, собирать бактериальные клетки (1.53 мл), выбросить супернатант, добавлять 100мкл Лизоцим (10мг/мл), тщательно перемешать бактериальные клетки, и инкубировать при комнатной температуре в течение 15-30 минуты.

Б. Грамотрицательные бактерии: Центрифугируйте бактериальную суспензию при 4 ℃., 12,000 об/мин для 2 минуты, собирать бактериальные клетки (1.53 мл), выбросить супернатант, добавлять 10мкл Лизоцим (10мг/мл), тщательно перемешать бактериальные клетки, и инкубировать при комнатной температуре в течение 3-5 минуты.

2.Добавлять 400мкл буфера для экстракции РНК I, вортекс, чтобы тщательно перемешать.

3. Перенесите лизат в колонку для очистки ДНК., центрифуга в 13,000 об/мин для 2 минуты, собрать фильтрат (РНК присутствует в фильтрате).

4. Точно оценить объем фильтрата, добавлять 0.5 раз объем абсолютного этанола, тщательно перемешать; если выпадут осадки, это не влияет на последующие эксперименты.

5. Добавьте полученную жидкость в колонку экстракционной очистки РНК. (примерно 650~700 мкл каждый раз), центрифуга при более чем 8,000 об/мин для 1 минута, выбросить собранную отработанную жидкость, и снова вставьте пробирку для сбора в колонку для экстракционной очистки РНК для следующего шага..

6. Повторить шаг 5, добавьте оставшуюся жидкость в колонку для экстракционной очистки РНК, центрифуга при более чем 8,000 об/мин для 1 минута, выбросьте отработанную жидкость и трубку для сбора.

7. Поместите колонку для экстракционной очистки РНК в новую пробирку для сбора., добавлять 600мкл буфера для удаления ингибитора, центрифуга при более чем 8,000 об/мин для 1 минута, выбросить отработанную жидкость, и снова вставьте колонку для экстракционной очистки РНК в пробирку для следующего шага..

8. Добавлять 700мкл промывочного буфера 1 в колонку очистки экстракции РНК, центрифуга в 14,000 об/мин (20,000×г) для 2 минуты, увеличьте время центрифугирования соответствующим образом, чтобы гарантировать, что мембрана полностью высушена.

(Примечание: Убедитесь, что в промывочный буфер добавлен абсолютный этанол. 1. Присутствие этанола серьезно влияет на последующие эксперименты., поэтому сушка мембраны имеет решающее значение. После центрифугирования, перед элюированием убедитесь, что этанол отсутствует. Выбросьте отработанную жидкость и трубку для сбора..

После промывки промывочным буфером 1, мембрана на колонке для экстракционной очистки РНК должна иметь лишь слабый цвет. После центрифугирования, осторожно извлеките колонку для экстракционной очистки РНК, не прикасаясь к пробирке для сбора, чтобы исключить влияние этанола.)

9. Поместите колонку для экстракционной очистки РНК в новую центрифужную пробирку., капать 100 мкл элюирующего буфера на мембрану, инкубировать при комнатной температуре в течение 5 минуты (15°С~25°С), центрифуга при более чем 8,000 об/мин для 1 минута.

(Примечание: Элюирование РНК с помощью 50 мкл элюционного буфера может увеличить концентрацию РНК, но снизить общий выход РНК..)

10. Повторите предыдущий шаг.

(Примечание: Для сбора РНК, элюированной во второй раз, можно использовать новую центрифужную пробирку., или можно использовать оригинальную пробирку для сбора РНК для продолжения сбора РНК..)