- Komponen kit reagen
| Spesifikasi | 50T | 100T |
| Kucing. TIDAK. | SN0321-D | SN0322-D |
| Kolom ekstraksi RNA (mengatur) | 50（套） | 100（套） |
| Kolom pembersihan DNA (mengatur) | 50（套） | 100（套） |
| Ekstraksi RNA Buffer I | 30ml | 2× 30 ml |
| Buffer penghapusan inhibitor | 30ml | 2×30 ml |
| Cuci Buffer 1 | 15 ml | 2×15 ml |
| Penyangga Elusi | 20ml | 2× 20 ml |
| Lisozim | 5ml | 2x5ml |
| Instruksi manual | 1 | 1 |
- Penyimpanan
Kit reagen ini harus disimpan pada suhu kamar (15-25℃) di lingkungan yang kering dan dapat dilestarikan 12 bulan. Lysozyme contains a preservative, allowing for transportation at room temperature; Namun, untuk penyimpanan jangka panjang, it should be stored at -20℃
- Petunjuk Penggunaan Kit Reagen
3.1 Kit ini ditujukan untuk tujuan penelitian biologi molekuler dan tidak boleh digunakan untuk diagnosis atau pengobatan penyakit.
3.2 Beberapa komponen dalam kit mengandung bahan pengiritasi; disarankan untuk mengambil tindakan pencegahan yang diperlukan (seperti memakai pakaian pelindung dan kacamata).
3.3 Penggunaan kit ini memerlukan peralatan tambahan seperti centrifuge berkecepatan tinggi, mandi air (mandi logam), pencampur pusaran, etanol anhidrat, nitrogen cair, khloroform, air deionisasi steril, dan tabung EP.
- Pengantar Kit Reagen
This RNA purification kit provides a rapid and efficient purification solution for bacterial RNA, suitable for most bacterial tissues. The kit employs DNA removal technology to effectively eliminate genomic DNA, and the resulting RNA samples typically do not require on-column digestion, reducing the risk of RNA degradation.
The RNA Fast Purification Kit allows for the extraction of total bacterial RNA (termasuk RNA nuklir dan RNA sitoplasma) di dalam 1 jam. RNA yang diekstraksi dapat langsung digunakan untuk RT-PCR, Northern blotting, dll.. The entire purification process does not involve toxic reagents such as phenol-chloroform, making the RNA purification kit well-suited for various sample types.
- Prinsip dan Prosedur Eksperimental
- Proses Ekstraksi
Tindakan pencegahan sebelum memulai percobaan:
A. Sebelum digunakan, Tambahkan jumlah etanol absolut yang ditentukan Cuci Buffer 1 seperti yang ditunjukkan pada label botol reagen, and mark with a check to indicate the addition of absolute ethanol.
B. Buffer Elusi adalah a 0.1x solusi TE mengandung sedikit EDTA. If EDTA may impact subsequent experiments, disarankan untuk mengganti buffer elusi dengan air deionisasi steril.
- Pemrosesan Sampel:
A. Gram-positive bacteria: Centrifuge the bacterial suspension at 4℃, 12,000 rpm untuk 2 menit, collect bacterial cells (1.53 ml), buang supernatannya, menambahkan 100μl lisozim (10mg/ml), thoroughly mix the bacterial cells, dan inkubasi pada suhu kamar selama 15-30 menit.
B. Gram-negative bacteria: Centrifuge the bacterial suspension at 4℃, 12,000 rpm untuk 2 menit, collect bacterial cells (1.53 ml), buang supernatannya, menambahkan 10μl lisozim (10mg/ml), thoroughly mix the bacterial cells, dan inkubasi pada suhu kamar selama 3-5 menit.
2.Menambahkan 400μl RNA Extraction Buffer I, vortex to mix thoroughly.
3. Transfer the lysate to a DNA clearance purification column, sentrifugasi di 13,000 rpm untuk 2 menit, collect the filtrate (RNA is present in the filtrate).
4. Accurately estimate the volume of the filtrate, menambahkan 0.5 times the volume of absolute ethanol, aduk rata; if precipitation occurs, it does not affect subsequent experiments.
5. Add the obtained liquid to the RNA extraction purification column (sekitar 650~700μl setiap kali), centrifuge lebih dari 8,000 rpm untuk 1 menit, Buang cairan limbah yang dikumpulkan, and reinsert the collection tube into the RNA extraction purification column for the next step.
6. Ulangi langkah 5, add the remaining liquid to the RNA extraction purification column, centrifuge lebih dari 8,000 rpm untuk 1 menit, discard the waste liquid and the collection tube.
7. Place the RNA extraction purification column into a new collection tube, menambahkan 600buffer penghapusan penghambat μl, centrifuge lebih dari 8,000 rpm untuk 1 menit, Buang cairan limbah, and reinsert the RNA extraction purification column into the tube for the next step.
8. Menambahkan 700μl buffer cuci 1 to the RNA extraction purification column, sentrifugasi di 14,000 rpm (20,000×g) untuk 2 menit, extend the centrifugation time appropriately to ensure the membrane is thoroughly dried.
(Catatan: Konfirmasikan bahwa etanol absolut telah ditambahkan ke Wash Buffer 1. The presence of ethanol has a serious impact on subsequent experiments, so membrane drying is crucial. Setelah sentrifugasi, ensure there is no ethanol present before elution. Discard the waste liquid and the collection tube.
After washing with Wash Buffer 1, the membrane on the RNA extraction purification column should only have a slight color. Setelah sentrifugasi, carefully remove the RNA extraction purification column without touching the collection tube to ensure no ethanol interference.)
- Place the RNA extraction purification column into a new centrifuge tube, menetes 100 μl Elution Buffer onto the membrane, Inkubasi pada suhu kamar untuk 5 menit (15°C~25°C), centrifuge lebih dari 8,000 rpm untuk 1 menit.
(Catatan: Mengelusi RNA dengan 50 μl Elution Buffer can increase RNA concentration but decrease total RNA yield.)
- Ulangi langkah sebelumnya.
(Catatan: A new centrifuge tube can be used to collect the RNA eluted the second time, or the original collection tube can be used to continue collecting RNA.)
Ulasan
Belum ada ulasan.