박테리아 총 RNA (...을 더한) 추출 키트

1. 시약 키트의 구성 요소

명세서	50티	100티
고양이. 아니요.	SN0321-D	SN0322-D
RNA 추출 컬럼 (세트)	50(세트)	100(세트)
DNA 청소 열 (세트)	50(세트)	100(세트)
RNA 추출 버퍼 i	30밀리리터	2× 30 밀리리터
억제제 제거 버퍼	30밀리리터	2× 30 ml
세척 버퍼 1	15 밀리리터	2× 15 ml
용출 버퍼	20밀리리터	2×20ml
라이소자임	5밀리리터	2x5ml
사용 설명서	1	1

2. 저장

이 시약 키트는 실온에서 보관해야 합니다. (15-25℃) 건조한 환경에서는 보존 할 수 있습니다 12 개월. 리소자임에는 방부제가 포함되어 있습니다, 실온에서 운송 가능; 하지만, 장기 저장 용, -20 °에 저장해야합니다

3. 시약 키트 사용 지침

3.1 이 키트는 분자 생물학 연구 목적으로 제작되었으며 질병 진단이나 치료에 사용해서는 안 됩니다..

3.2 키트의 일부 구성품에는 자극제가 포함되어 있습니다.; 필요한 예방 조치를 취하는 것이 좋습니다 (보호복과 고글을 착용하는 등).

3.3 이 키트를 사용하려면 고속 원심분리기 등 추가 장비가 필요합니다., 욕조 (금속 욕조), 소용돌이 믹서, 무수에탄올, 액체 질소, 클로로포름, 멸균 탈이온수, 및 EP 튜브.

4. 시약 키트 소개

이 RNA 정제 키트는 박테리아 RNA에 대한 빠르고 효율적인 정제 솔루션을 제공합니다., 대부분의 박테리아 조직에 적합합니다. 이 키트는 게놈 DNA를 효과적으로 제거하기 위해 DNA 제거 기술을 사용합니다., 결과적으로 생성 된 RNA 샘플은 일반적으로 컬럼에 소화가 필요하지 않습니다., RNA 분해의 위험 감소.

RNA 빠른 정제 키트는 총 박테리아 RNA의 추출을 허용합니다. (핵 RNA 및 세포질 RNA 포함) 이내에 1 시간. 추출된 RNA를 RT에 바로 활용 가능-PCR, 노던 블로팅, 등. 전체 정제 과정은 페놀 클로로포름과 같은 독성 시약을 포함하지 않습니다., 다양한 샘플 유형에 적합한 RNA 정제 키트 만들기.

5. 실험 원리 및 절차

6. 추출과정

실험 시작 전 주의사항:

ㅏ. 사용하기 전에, 지정된 양의 무수 에탄올을 첨가하십시오. 세척 버퍼 1 시약병 라벨에 표시된 대로, 그리고 절대 에탄올의 첨가를 나타내는 점검으로 표시.

비. 용출 완충액은 0.1x TE 솔루션 최소한의 EDTA 함유. EDTA가 후속 실험에 영향을 줄 수있는 경우, Elution Buffer를 멸균 탈이온수로 교체하는 것이 좋습니다..

1. 샘플 처리:

ㅏ. 그람 양성 박테리아: 4 ℃에서 박테리아 현탁액을 원심 분리하십시오, 12,000 rpm 2 분, 박테리아 세포를 수집하십시오 (1.53 밀리리터), 상층액을 버린다, 추가하다 100μl 리소자임 (10mg/ml), 박테리아 세포를 철저히 혼합하십시오, 그리고 실온에서 배양하세요 15-30 분.

비. 그람 음성 박테리아: 4 ℃에서 박테리아 현탁액을 원심 분리하십시오, 12,000 rpm 2 분, 박테리아 세포를 수집하십시오 (1.53 밀리리터), 상층액을 버린다, 추가하다 10μl 리소자임 (10mg/ml), 박테리아 세포를 철저히 혼합하십시오, 그리고 실온에서 배양하세요 3-5 분.

2.추가하다 400μL RNA 추출 완충액 I., 소용돌이가 철저히 섞습니다.

3. 용 해물을 DNA 클리어런스 정제 컬럼으로 옮깁니다, 원심분리기 13,000 rpm 2 분, 여과 액을 수집하십시오 (RNA는 여과 액에 존재한다).

4. 여과 액의 부피를 정확하게 추정합니다, 추가하다 0.5 시간에 절대 에탄올의 부피, 잘 섞는다; 강수량이 발생하는 경우, 후속 실험에는 영향을 미치지 않습니다.

5. RNA 추출 정제 컬럼에 얻은 액체를 추가하십시오. (매번 약 650~700μl), 이상의 원심분리기 8,000 rpm 1 분, 수집된 폐액을 폐기합니다., 다음 단계를 위해 수집 튜브를 RNA 추출 정제 컬럼으로 다시 삽입하십시오..

6. 단계 반복 5, RNA 추출 정제 컬럼에 나머지 액체를 추가하십시오., 이상의 원심분리기 8,000 rpm 1 분, 폐기물 액체와 수집 튜브를 폐기하십시오.

7. RNA 추출 정화 열을 새로운 컬렉션 튜브에 배치하십시오., 추가하다 600μl 억제제 제거 완충액, 이상의 원심분리기 8,000 rpm 1 분, 폐액을 버리다, 그리고 다음 단계를 위해 RNA 추출 정제 컬럼을 튜브에 다시 삽입하십시오..

8. 추가하다 700μl 세척 완충액 1 RNA 추출 정제 컬럼에, 원심분리기 14,000 rpm (20,000×g) ~을 위한 2 분, 막이 철저히 건조되도록 원심 분리 시간을 적절하게 연장하십시오..

(메모: 절대 에탄올이 세척 완충액에 첨가되었는지 확인하십시오. 1. 에탄올의 존재는 후속 실험에 심각한 영향을 미칩니다., 그래서 멤브레인 건조가 중요합니다. 원심분리 후, 용리하기 전에 에탄올이 없는지 확인하십시오. 폐기물 액체와 수집 튜브를 폐기하십시오.

세척 완충제로 세척 한 후 1, RNA 추출 정제 컬럼의 막에는 약간의 색이 있어야합니다.. 원심분리 후, 에탄올 간섭이 없도록 수집 튜브에 닿지 않고 RNA 추출 정제 컬럼을 조심스럽게 제거하십시오..)

9. RNA 추출 정제 컬럼을 새로운 원심 분리 튜브에 배치하십시오., 똑똑 떨어지는 물방울 소리 100 막에 μL 용리 완충액, 실온에서 배양하다 5 분 (15° C ~ 25 ° C), 이상의 원심분리기 8,000 rpm 1 분.

(메모: RNA 용출 50 μL 용리 완충액은 RNA 농도를 증가 시키지만 총 RNA 수율을 감소시킬 수 있습니다..)

10. 이전 단계를 반복하세요..

(메모: 새로운 원심 분리 튜브는 두 번째로 용리 된 RNA를 수집하는 데 사용될 수 있습니다., 또는 원래 수집 튜브를 사용하여 RNA를 계속 수집 할 수 있습니다..)