- Composants du kit de réactifs
| Caractéristiques | 50T | 100T |
| Chat. Non. | SN0321-D | SN0322-D |
| Colonnes d'extraction d'ARN (ensemble) | 50（套） | 100（套） |
| Colonnes de nettoyage d'ADN (ensemble) | 50（套） | 100（套） |
| Extraction d'ARN Buffer I | 30ml | 2× 30 ml |
| Tampon d'élimination des inhibiteurs | 30ml | 2×30 ml |
| Tampon de lavage 1 | 15 ml | 2×15 ml |
| Tampon d'élution | 20ml | 2×20ml |
| Lysozyme | 5ml | 2x5ml |
| Manuel d'instructions | 1 | 1 |
- Stockage
Ce kit de réactifs doit être conservé à température ambiante (15-25℃) dans un environnement sec et peut être conservé pendant 12 mois. Lysozyme contains a preservative, allowing for transportation at room temperature; cependant, pour un stockage à long terme, it should be stored at -20℃
- Instructions d'utilisation du kit de réactifs
3.1 Ce kit est destiné à des fins de recherche en biologie moléculaire et ne doit pas être utilisé pour le diagnostic ou le traitement de maladies..
3.2 Certains composants du kit contiennent des irritants; il est conseillé de prendre les précautions nécessaires (comme porter des vêtements de protection et des lunettes).
3.3 L'utilisation de ce kit nécessite un équipement supplémentaire tel qu'une centrifugeuse à grande vitesse, bain d'eau (bain en métal), mélangeur de vortex, éthanol anhydre, l'azote liquide, chloroforme, eau déminéralisée stérile, et tubes EP.
- Introduction au kit de réactifs
This RNA purification kit provides a rapid and efficient purification solution for bacterial RNA, suitable for most bacterial tissues. The kit employs DNA removal technology to effectively eliminate genomic DNA, and the resulting RNA samples typically do not require on-column digestion, reducing the risk of RNA degradation.
The RNA Fast Purification Kit allows for the extraction of total bacterial RNA (y compris l'ARN nucléaire et l'ARN cytoplasmique) dans 1 heure. L'ARN extrait peut être directement utilisé pour la RT-RAP, Transfert du Nord, etc.. The entire purification process does not involve toxic reagents such as phenol-chloroform, making the RNA purification kit well-suited for various sample types.
- Principes et procédures expérimentaux
- Processus d'extraction
Précautions avant de commencer l'expérience:
UN. Avant utilisation, ajouter la quantité spécifiée d'éthanol absolu à Tampon de lavage 1 comme indiqué sur l'étiquette du flacon de réactif, and mark with a check to indicate the addition of absolute ethanol.
B. Le tampon d'élution est un 0.1x solution TE containing a minimal amount of EDTA. If EDTA may impact subsequent experiments, il est recommandé de remplacer le tampon d'élution par de l'eau déionisée stérile.
- Traitement des échantillons:
UN. Bactéries à Gram positif: Centrifuge the bacterial suspension at 4℃, 12,000 tr/min pour 2 minutes, collect bacterial cells (1.53 ml), jeter le surnageant, ajouter 100μl Lysozyme (10mg/ml), thoroughly mix the bacterial cells, et incuber à température ambiante pendant 15-30 minutes.
B. Bactéries à Gram négatif: Centrifuge the bacterial suspension at 4℃, 12,000 tr/min pour 2 minutes, collect bacterial cells (1.53 ml), jeter le surnageant, ajouter 10μl Lysozyme (10mg/ml), thoroughly mix the bacterial cells, et incuber à température ambiante pendant 3-5 minutes.
2.Ajouter 400μl RNA Extraction Buffer I, vortex to mix thoroughly.
3. Transfer the lysate to a DNA clearance purification column, centrifuger à 13,000 tr/min pour 2 minutes, récupérer le filtrat (L'ARN est présent dans le filtrat).
4. Accurately estimate the volume of the filtrate, ajouter 0.5 times the volume of absolute ethanol, bien mélanger; if precipitation occurs, cela n'affecte pas les expériences ultérieures.
5. Ajouter le liquide obtenu à la colonne de purification d’extraction d’ARN (environ 650 ~ 700 μl à chaque fois), centrifuger à plus de 8,000 tr/min pour 1 minute, jeter les déchets liquides collectés, and reinsert the collection tube into the RNA extraction purification column for the next step.
6. Répétez l'étape 5, ajouter le liquide restant à la colonne de purification d'extraction d'ARN, centrifuger à plus de 8,000 tr/min pour 1 minute, discard the waste liquid and the collection tube.
7. Place the RNA extraction purification column into a new collection tube, ajouter 600μl de tampon d'élimination des inhibiteurs, centrifuger à plus de 8,000 tr/min pour 1 minute, jeter les déchets liquides, and reinsert the RNA extraction purification column into the tube for the next step.
8. Ajouter 700µl de tampon de lavage 1 to the RNA extraction purification column, centrifuger à 14,000 tr/min (20,000×g) pour 2 minutes, extend the centrifugation time appropriately to ensure the membrane is thoroughly dried.
(Note: Confirmez que de l'éthanol absolu a été ajouté au tampon de lavage. 1. The presence of ethanol has a serious impact on subsequent experiments, le séchage par membrane est donc crucial. Après centrifugation, ensure there is no ethanol present before elution. Discard the waste liquid and the collection tube.
Après lavage avec Wash Buffer 1, the membrane on the RNA extraction purification column should only have a slight color. Après centrifugation, carefully remove the RNA extraction purification column without touching the collection tube to ensure no ethanol interference.)
- Place the RNA extraction purification column into a new centrifuge tube, goutte 100 µl de tampon d'élution sur la membrane, incuber à température ambiante pendant 5 minutes (15°C~25°C), centrifuger à plus de 8,000 tr/min pour 1 minute.
(Note: Élution de l'ARN avec 50 μl Elution Buffer can increase RNA concentration but decrease total RNA yield.)
- Répétez l'étape précédente.
(Note: A new centrifuge tube can be used to collect the RNA eluted the second time, or the original collection tube can be used to continue collecting RNA.)
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