β-半乳糖苷酶 (β-gal) 檢測試劑盒
筆記: 測試前取兩個或三個不同的樣本進行預測.
操作設備: 微型讀取器/分光光度計
目錄編號: BC2585
尺寸:100T/48S
成分:
萃取液: 液體 100 毫升×1. 4℃保存.
解決方案i: 粉末×1. -20℃保存. 添加 2.55 毫升每瓶蒸餾水，然後完全溶解並完全溶解. 左試劑店-20℃.
解決方案ⅱ: 液體 4 毫升×1. 4℃保存.
解決方案ⅲ: 液體 15 毫升×1. 4℃保存.
標準: 液體 1 毫升×1. 4℃保存. 5 μmol/ml p-硝基苯酚溶液.
產品描述
β-半乳糖苷酶 (β-gal, 歐共體 3.2.1.23) 是一種酶廣泛存在於動物中, 植物, 微生物和培養細胞, 可以催化β-半乳糖基鍵的水解，並且具有遠糖基化的功能. β-gal可以釋放儲存的能量以快速生長, 還催化多醣的降解, 糖蛋白, 正常多醣代謝中的半乳糖末端半乳糖殘基, 細胞壁成分代謝和在老化的細胞壁上釋放自由半乳糖.
β-gal可以催化p-硝基苯基-β-吡喃半乳糖苷至p-硝基苯酚. 該產品具有吸收的特徵 400 奈米. 在這個套件中, 通過測量顏色發展的增加來量化β-gal活性 400 奈米.
需要但未提供的試劑和設備.
酶標儀或分光光度計, 離心機, 水浴, 移液管, 微型玻璃比色皿/96孔平底板, 冰, 砂漿/均勻劑和蒸餾水.
程式
我. 標準樣品的準備:
- 細菌或細胞
將細菌或細胞收集到離心管中, 離心丟棄上清液後. 建議添加 1 ml提取溶液 5 百萬個細菌或細胞. 使用超聲化來分裂細菌和細胞 (置於冰上, 超音波功率 20%, 工作時間 3 秒, 間隔 10 秒, 重複 30 次). 以15000×g離心 20 4分鐘在4℃去除不溶性材料並在測試前將上清液取冰.
- 組織
添加 1 ml提取溶液 0.1 克組織, 並在冰浴上完全勻漿. 以15000×g離心 20 4℃分鐘去除不溶物, 並在測試前將上清液放在冰上.
二. 決心
- 預熱微板讀取器或分光光度計的時間超過 30 分分鐘, 調整波長至 400 奈米, 用蒸餾水調零.
- 標準將解決方案稀釋到 200, 100, 50, 25, 12.5, 6.25, 0 NMOL/mL與蒸餾水.
- 加入如下清單的試劑:
| 試劑 | 試管 (時間) | 對比管 (C) | 標準管 (S) |
| 解決方案i (微升) | 25 | – | – |
| 蒸餾水 (微升) | – | 25 | – |
| 解決方案ⅱ (微升) | 35 | 35 | – |
| 樣本 (微升) | 10 | 10 | – |
| 徹底混合併孵育反應 30 37℃水浴的分鐘. | |||
| 標準 (微升) | – | – | 70 |
| 解決方案ⅲ (微升) | 130 | 130 | 130 |
充分混合. 檢測每個管子的吸光度 400 nm，如有, 交流電, AS和AB. 計算
ΔAT= at – 交流電, ΔAS= as – AB. 每個試管應配備一個對比管.
三、. 計算:
1. 標準曲線
標準曲線已建立: 根據標準管的濃度 (y nmol/ml) 和吸光度ΔAS= AS – AB (X), 建立標準曲線. 將ΔA添加到標準曲線中, 併計算樣品產生的產品量 (納摩爾/毫升).
2. 計算
- 組織蛋白濃度
單位定義: 1個酵素活力單位定義為催化產生的酵素的量 1 每小時反應系統中的P-硝基苯酚的Nmol, 每個MG蛋白.
β-gal活性(U/毫克蛋白質)=(y×vrv)÷(Vs×Cpr)÷t = 14×y÷cpr
- 組織重量
單位定義: 1個酵素活力單位定義為催化產生的酵素的量 1 每小時反應系統中的P-硝基苯酚的Nmol, 每個G樣本.
β-gal活性(u/g )= (y×vrv)÷(w×vs÷ve)÷t = 14×y÷w
- 細菌或培養細胞
單位定義: 1個酵素活力單位定義為催化產生的酵素的量 1 每小時反應系統中的P-硝基苯酚的Nmol, 每一個 104 細菌或細胞.
β-gal活性(U/104細胞)=(y×vrv)÷(500×Vs÷Ve)÷t = 0.028×y
心肺復甦: 上清液樣品蛋白濃度 (毫克/毫升); 繩索: 總反應體積, 0.07 毫升;
VS: 超級體積, 0.01 毫升; 維: 萃取液體積,1 毫升;
時間: 反應時間 (分分鐘), 30 分鐘= 0.5 小時; 瓦: 樣品重量, G;
500: 5 百萬個細胞或細菌.
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