β-갈락토시다아제 (β-GAL) 분석 키트
메모: 테스트 전에 예측을 위해 2~3개의 서로 다른 샘플을 채취합니다..
운영장비: 마이크로플레이트 리더/분광 광도계
카탈로그 번호: BC2585
크기:100T/48S
구성요소:
용액 추출: 액체 100 밀리리터×1. 4℃에서 보관.
해결책 I: 가루×1. -20℃에서 보관. 추가하다 2.55 사용 전 병당 1mL의 증류수를 넣고 완전히 녹입니다.. 왼쪽 시약 저장소 -20℃.
솔루션 Ⅱ: 액체 4 밀리리터×1. 4℃에서 보관.
솔루션 Ⅲ: 액체 15 밀리리터×1. 4℃에서 보관.
기준: 액체 1 밀리리터 ×1. 4℃에서 보관. 5 μmol/mL p-니트로페놀 용액.
제품 설명
β-갈락토시다아제 (β-GAL, EC 3.2.1.23) 동물에서 광범위하게 발견되는 효소입니다., 식물, 미생물과 배양세포, 이는 β-갈락토실 결합의 가수분해를 촉매할 수 있고 또한 글리코실화 기능을 가지고 있습니다.. β-GAL은 식물의 빠른 성장을 위해 저장된 에너지를 방출할 수 있습니다., 또한 다당류의 분해를 촉진합니다., 당단백질, 정상적인 다당류 대사에서 갈락토스 말단 갈락토스 잔기, 세포벽 성분 대사 및 노화 동안 세포벽이 유리 갈락토오스를 방출함.
β-GAL은 p-니트로 페닐-β-피란 갈락토시드를 p-니트로 페놀로 촉매작용할 수 있습니다.. 제품은 흡수되는 특성을 가지고 있습니다. 400 nm. 이 키트에는, β-GAL 활성은 발색의 증가를 측정하여 정량화됩니다. 400 nm.
필요하지만 제공되지 않는 시약 및 장비.
마이크로플레이트 리더 또는 분광 광도계, 원심분리기, 욕조, 이송 피펫, 마이크로 유리 큐벳/96웰 평면 바닥 플레이트, 얼음, 모르타르/균질화기 및 증류수.
절차
나. 표준 샘플의 준비:
- 박테리아 또는 세포
박테리아 또는 세포를 원심분리 튜브에 수집, 원심분리 후 상청액 폐기. 추가 제안 1 mL의 추출 용액 5 수백만 개의 박테리아 또는 세포. 초음파 처리를 사용하여 박테리아와 세포를 분리합니다. (얼음 위에 놓음, 초음파 파워 20%, 근무 시간 3 초, 간격 10 초, 반복하다 30 타임스). 15000×g의 원심분리기 20 4℃에서 1분간 가온하여 불용성 물질을 제거하고 상등액을 얼음에 취하여 시험한다.
- 조직
추가하다 1 mL의 추출 용액 0.1 g의 조직, 얼음조에서 완전히 균질화됩니다.. 15000×g의 원심분리기 20 4℃에서 1분 동안 불용성 물질 제거, 시험하기 전에 얼음에 상등액을 채취하십시오..
II. 결정
- 마이크로플레이트 리더 또는 분광 광도계를 1시간 이상 예열하세요. 30 분, 파장을 조정하여 400 nm, 증류수로 0을 설정하다.
- 표준액을 다음과 같이 희석한다. 200, 100, 50, 25, 12.5, 6.25, 0 nmol/mL(증류수 포함).
- 다음 목록으로 시약을 추가하세요.:
| 시약 | 시험관 (티) | 대비 튜브 (씨) | 표준 튜브 (에스) |
| 해결책 I (μL) | 25 | – | – |
| 증류수 (μL) | – | 25 | – |
| 솔루션 Ⅱ (μL) | 35 | 35 | – |
| 견본 (μL) | 10 | 10 | – |
| 철저하게 혼합하고 반응물을 배양합니다. 30 37℃ 수조에서 1분. | |||
| 기준 (μL) | – | – | 70 |
| 솔루션 Ⅲ (μL) | 130 | 130 | 130 |
잘 섞어주세요. 각 튜브의 흡광도를 감지합니다. 400 nm, AT로 표시됨, 교류, AS와 AB. 믿다
ΔAT= AT – 교류, ΔAS = 그대로 – AB. 각 시험관에는 하나의 조영관이 제공되어야 합니다..
III. 믿다:
1. 표준곡선
표준곡선 확립: 표준 튜브의 농도에 따라 (y nmol/mL) 및 흡광도 ΔAS= AS – AB (엑스), 표준곡선을 확립하다. 표준 곡선에 ΔA를 추가합니다., 샘플에서 생성된 제품의 양을 계산합니다. (nmol/mL).
2. 계산
- 조직 단백질 농도
단위 정의: 효소 활성의 1단위는 다음과 같은 효소의 생성을 촉매하는 효소의 양으로 정의됩니다. 1 시간당 반응 시스템의 p-니트로페놀 nmol, 모든 mg 단백질.
β-GAL 활동(U/mg 프로트)=(y×Vrv)¶(VS×심폐소생술)¤T=14×y²Cpr
- 조직 무게
단위 정의: 효소 활성의 1단위는 다음과 같은 효소의 생성을 촉매하는 효소의 양으로 정의됩니다. 1 시간당 반응 시스템의 p-니트로페놀 nmol, 모든 g 샘플.
β-GAL 활동(U/g )= (y×Vrv)¶(W×Vs²Ve)¼T=14×y²W
- 박테리아 또는 배양된 세포
단위 정의: 효소 활성의 1단위는 다음과 같은 효소의 생성을 촉매하는 효소의 양으로 정의됩니다. 1 시간당 반응 시스템의 p-니트로페놀 nmol, 모든 104 박테리아 또는 세포.
β-GAL 활동(U/104 셀)=(y×Vrv)¶(500×Vs│Ve)¶T=0.028×y
심폐소생술: 상청액 샘플 단백질 농도 (mg/mL); 로프: 총 반응량, 0.07 밀리리터;
대: 슈퍼네이트 볼륨, 0.01 밀리리터; 베: 솔루션 볼륨 추출,1 밀리리터;
티: 반응 시간 (분), 30 분 = 0.5 시간; 여: 샘플 중량, g;
500: 5 백만 개의 세포 또는 박테리아.
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