Solarbio β-galactosidase (β-GAL) Kit di analisi

β-galactosidase (β-GAL) Kit di analisi

Nota: Prendi due o tre campioni diversi per la previsione prima del test.

Attrezzatura operativa: Microplate Reader/Spectrophotometer

Numero di catalogo: BC2585

Misurare:100T/48S

Componenti:

Estrarre la soluzione: Liquido 100 ml×1. Conservazione a 4 ℃.

Solution I: Polvere×1. Conservazione a -20 ℃. Aggiungere 2.55 mL of distilled water to per bottle before use and dissolve it fully. The left reagent store at -20℃.

Solution Ⅱ: Liquido 4 ml×1. Conservazione a 4 ℃.

Solution Ⅲ: Liquido 15 ml×1. Conservazione a 4 ℃.

Standard: Liquido 1 ml×1. Conservazione a 4 ℃. 5 μmol/mL p-nitrophenol solution.

Descrizione del prodotto

β-galactosidase (β-GAL, CE 3.2.1.23) is an enzyme found broadly in animals, impianti, microrganismi e cellule in coltura, which can catalyze the hydrolysis of β-galactosyl bonds and also has the function of transglycosylation. β-GAL can release stored energy for the rapid growth of plants, also catalyzes the degradation of polysaccharides, glycoproteins, and galactose terminal galactose residues in normal polysaccharide metabolism, cell wall component metabolism and during aging cell wall to release free galactose.

β-GAL can catalyze the p-nitro phenyl-β-pyran galactoside to p-nitro phenol. The product has characteristic of absorption at 400 nm. In this kit, the β-GAL activity is quantified by measuring the increase in the color development at 400 nm.

Reagenti e attrezzature necessari ma non forniti.

Lettore di micropiastre o spettrofotometro, centrifuga, bagnomaria, pipetta di trasferimento, microcuvetta in vetro/piastra a fondo piatto da 96 pozzetti, ghiaccio, mortar/homogenizer and distilled water.

Procedura

IO. Preparation of standard samples:

1. Batteri o cellule

Raccolta di batteri o cellule nella provetta da centrifuga, after centrifugation discard supernatant. Suggest add 1 mL of Extract solution to 5 milioni di batteri o cellule. Usa l'ecografia per dividere i batteri e le cellule (posto sul ghiaccio, ultrasonic power 20%, working time 3 secondi, intervallo 10 secondi, ripetere per 30 volte). Centrifuge at 15000×g for 20 minuti a 4 ℃ per rimuovere i materiali insolubili e prendere il surnatante sul ghiaccio prima di testare.

2. Tessuto

Aggiungere 1 mL of Extract solution to 0.1 g di tessuto, and fully homogenized on ice bath. Centrifuge at 15000×g for 20 minuti a 4℃ per rimuovere materiali insolubili, e portare il surnatante sul ghiaccio prima del test.

II. Determinazione

1. Preheat the microplate reader or spectrophotometer for more than 30 minuti, regolare la lunghezza d'onda su 400 nm, azzerare con acqua distillata.
2. Standard Dilute the solution to 200, 100, 50, 25, 12.5, 6.25, 0 nmol/mL with distilled water.

3. Aggiungere i reagenti con il seguente elenco:

Mescolare accuratamente. Detect the absorbance of each tube at 400 nm and noted as AT, AC, AS and AB. Calculate

ΔAT= AT – AC, ΔAS = AS – AB. Each test tube should be provided with one contrast tube.

III. Calculate:

1. Curva standard

Standard curve established: According to the concentration of the standard tube (y nmol/mL) and absorbance ΔAS= AS – AB (X), establish the standard curve. Add ΔA into the standard curve, and calculate the amount of product generated by the sample (nmol/mL).

2. Calcolo

• Concentrazione proteica tissutale

Definizione di unità: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzymes catalyzes the generation of 1 nmol of p-nitrophenol in the reaction system per hour, ogni mg di proteine.

β-GAL Activity(U/mg prot)=(y×Vrv)÷(Vs×Cpr)÷T=14×y÷Cpr

• Peso del tessuto

Definizione di unità: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzymes catalyzes the generation of 1 nmol of p-nitrophenol in the reaction system per hour, ogni g di campione.

β-GAL Activity(U/g )= (y×Vrv)÷(W × vs ÷ ve)÷T=14×y÷W

• Batteri o cellule coltivate

Definizione di unità: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzymes catalyzes the generation of 1 nmol of p-nitrophenol in the reaction system per hour, ogni 104 batteri o cellule.

β-GAL Activity(Cella U/104)=(y×Vrv)÷(500×Vs÷Ve)÷T=0.028×y

Cpr: Concentrazione di proteina del campione di surnatante (mg/ml); Corda: Volume totale di reazione, 0.07 ml;

Contro: Supernate volume, 0.01 ml; Ve: Estrarre il volume della soluzione,1 ml;

T: Tempo di reazione (min), 30 minutes = 0.5 ora; W: Peso del campione, G;

500: 5 milioni di cellule o batteri.

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