2× แท็ค พีซีอาร์ มาสเตอร์มิกซ์ (พร้อมสีย้อม)
หมายเลขสินค้า: E002 ข้อมูลจำเพาะ:1การจัดเก็บมล: เก็บที่อุณหภูมิ -20°C
การแนะนำสินค้า:
ส่วนผสมหลัก 2x Taq PCR (ด้วยสีย้อม) เป็นสารละลายผสมล่วงหน้าที่มีความเข้มข้นเป็นสองเท่าของ DNA Polymerase, บัฟเฟอร์ PCR, dNTP มิกซ์, และตัวชี้วัด. เมื่อใช้ผลิตภัณฑ์นี้, เพียงเพิ่มเทมเพลตและไพรเมอร์ลงในโซลูชันผสมเสร็จ, และเติมปริมาตรด้วย ddH2O สำหรับปฏิกิริยา PCR. ซึ่งช่วยลดความซับซ้อนของขั้นตอนการปฏิบัติงานและลดความเสี่ยงของการปนเปื้อนในระหว่างขั้นตอน PCR. นอกจากนี้, สารละลายผสมล่วงหน้าประกอบด้วยรีเอเจนต์สีย้อมที่จำเป็นสำหรับเจลอิเล็กโทรโฟรีซิส, เปิดใช้งานเจลอิเล็กโตรโฟรีซิสโดยตรงหลังจาก PCR. ผลิตภัณฑ์นี้มีความไวสูง, ความจำเพาะที่แข็งแกร่ง, และช่วงเชิงเส้นที่กว้าง, ช่วยให้สามารถระบุปริมาณยีนเป้าหมายได้แม่นยำยิ่งขึ้น. ผลิตภัณฑ์ PCR ที่ขยายโดยใช้ผลิตภัณฑ์นี้มีฐาน A เพิ่มที่ 3′ จบ, อำนวยความสะดวกในการโคลนนิ่งเป็นเวกเตอร์ T.
เนื้อหาผลิตภัณฑ์:
ส่วนประกอบ | E002 |
2× Taq PCR Master Mix (พร้อมสีย้อม) | 1มล |
พื้นที่จัดเก็บ:
เก็บที่อุณหภูมิ -20°C, โดยมีอายุการเก็บรักษาขั้นต่ำที่ 12 เดือน.
ควบคุมคุณภาพ:
ผลิตภัณฑ์นี้ผ่านการทดสอบคุณภาพและปราศจากกิจกรรมของเอ็นโดนิวคลีเอส, กิจกรรมเอ็กโซนิวคลีเอส, และการปนเปื้อนของไรโบนิวคลีเอส. DNA จีโนมของโฮสต์ที่เหลืออยู่ด้านล่าง 10 สำเนา.
การใช้ผลิตภัณฑ์:
การขยาย DNA โดยใช้วิธี PCR; การกำหนดลำดับดีเอ็นเอ.
คำแนะนำการใช้งาน:
- ปล่อยให้สารละลายปฏิกิริยา PCR ที่จำเป็นทั้งหมดปรับสมดุลกับอุณหภูมิห้องจนกระทั่งละลายหมด. ผสมสารละลายให้ละเอียดและตั้งค่าระบบปฏิกิริยา PCR บนน้ำแข็ง.
- ขอแนะนำให้ติดตั้งระบบปฏิกิริยา PCR บนอ่างน้ำแข็งหรือในเครื่องทำความเย็น, ปฏิบัติตามระบบปฏิกิริยาที่แนะนำเพื่อใช้อ้างอิง.
- ปิเปตอย่างทั่วถึงและผสมระบบปฏิกิริยาที่เตรียมไว้โดยใช้ปิเปต, ปิดผนึกท่อ PCR ด้วยฝาปิด, ติดป้ายกำกับอย่างเหมาะสม, และปั่นแยกที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลาสั้นๆ.
- วางท่อ PCR ที่เตรียมไว้ลงใน เครื่องพีซีอาร์, กำหนดเงื่อนไขการเกิดปฏิกิริยา, และเริ่มต้นปฏิกิริยา PCR.
ระบบปฏิกิริยาที่แนะนำ:
รีเอเจนต์ | 25ปริมาตรของระบบ µL | ความเข้มข้นสุดท้าย |
2× Taq PCR Master Mix (พร้อมสีย้อม) | 12.5ไมโครลิตร | 1× |
ไพรเมอร์ I (10µM) | 0.5-2.5ไมโครลิตร | 0.2-1.0ไมโครเมตร |
ครั้งแรกครั้งที่สอง (10µM) | 0.5-2.5ไมโครลิตร | 0.2-1.0ไมโครเมตร |
แม่แบบดีเอ็นเอ | 1ไมโครลิตรตามต้องการ | - |
ddH2โอ | สูงถึง 25μL | - |
สภาวะของปฏิกิริยา:
ภายใต้สถานการณ์ปกติ, สามารถใช้วิธีสองขั้นตอนสำหรับปฏิกิริยาได้. หากการขยายเสียงแบบสองขั้นไม่เป็นที่พอใจ, สามารถใช้วิธีสามขั้นตอนในการตั้งค่าโปรแกรมปฏิกิริยา PCR. พิจารณาความไม่แน่นอนของความอุดมสมบูรณ์ของยีนเป้าหมายในเทมเพลต cDNA, ขอแนะนำให้ใช้ 35-38 รอบสำหรับการขยายครั้งแรกและปรับจำนวนรอบตามผลการขยาย.
วิธีการ/ขั้นตอน | การตั้งเวลา | รอบ |
95℃ (การเสียสภาพก่อนกำหนด) | 2-5นาที | 1 |
95℃ (การเสียสภาพ) | 10วินาที | 28-40รอบ
(เทมเพลตพลาสมิดหรือจีโนม:28-35รอบ; เทมเพลต cDNA:30-40รอบ) |
55℃ -60 ℃ (การหลอม) | 30วินาที | |
72℃ (ส่วนขยาย) | 1นาที / 1-3กิโลไบต์ | |
72℃ (ส่วนขยายสุดท้าย) | 5-10นาที | 1 |
4℃ / 16 ℃ (กดค้าง) | ∞ | - |
บันทึก: สภาวะของปฏิกิริยาสามารถปรับและปรับให้เหมาะสมตามความต้องการที่แท้จริงได้.
ข้อควรระวัง:
- เวลาในการขยายสามารถปรับได้ขึ้นอยู่กับปัจจัยต่างๆ เช่น ความยาวและเนื้อหา GC ของผลิตภัณฑ์ PCR. เวลาในการขยายต่อ kb ของผลิตภัณฑ์มีความสัมพันธ์อย่างใกล้ชิดกับความซับซ้อนของเทมเพลต: ต้องใช้เทมเพลตง่ายๆ 20 วินาที, เทมเพลตทั่วไปที่ต้องการ 30 วินาที, และต้องใช้เทมเพลตที่ซับซ้อน 1 นาที.
- การตั้งค่าปฏิกิริยา PCR ควรได้รับการปรับแต่งให้เหมาะกับสภาวะที่แตกต่างกัน เช่น เทมเพลต, ไพรเมอร์, ความยาวของผลิตภัณฑ์ PCR, และเนื้อหา GC. โดยทั่วไปความเข้มข้นสุดท้ายของไพรเมอร์จะอยู่ในช่วง 0.2-1.0μM. ความเข้มข้นของเทมเพลต DNA สามารถปรับเปลี่ยนได้ตามความเหมาะสม. สำหรับเทมเพลตที่ซับซ้อนหรือเนื้อหา GC สูง, ขอแนะนำให้ยืดเวลาก่อนการเสียสภาพ/การเสียสภาพหรือการขยายเวลา และเพิ่มอุณหภูมิการเสียสภาพ/การอบอ่อน.
- ใช้พื้นที่และปิเปตที่กำหนดไว้ก่อนและหลังการขยายสัญญาณ, ใส่ถุงมือ, และเปลี่ยนบ่อยๆ. หลังจากทำปฏิกิริยา PCR เสร็จแล้ว, อย่าเปิดท่อปฏิกิริยาทันที. ปล่อยให้เย็นเพียงพอที่ 4°C หรือ -20°C ก่อนเปิดเพื่อลดความเสี่ยงของการปนเปื้อนของผลิตภัณฑ์ PCR ต่อสภาพแวดล้อมในห้องปฏิบัติการ.
*สำหรับ OEM, โปรดติดต่อพนักงานขายของเรา
รีวิว
ยังไม่มีบทวิจารณ์