2×taq PCR マスターミックス(染料)
商品番号: E002 仕様:1MLストレージ: -20℃で保存
製品導入:
2x TAQ PCRマスターミックス (染料付き) DNAポリメラーゼの濃度の2倍の溶液です, PCRバッファー, DNTPミックス, およびインジケーター. この製品を使用する場合, 予測ソリューションにテンプレートとプライマーを追加するだけです, PCR反応のためにDDH2Oでボリュームを完成させます. これにより、運用手順が簡素化され、PCR手順中の汚染のリスクが軽減されます. さらに, Premixed溶液には、ゲル電気泳動に必要な染料試薬が含まれています, PCR後の直接ゲル電気泳動を有効にします. この製品は高感度を提供します, 強い特異性, そして広い線形範囲, 標的遺伝子のより正確な定量化を可能にします. この製品を使用して増幅されたPCR製品には、3にベースが追加されています′ 終わり, Tベクターへのクローニングを促進します.
商品内容:
コンポーネント | E002 |
2×taq pcrマスターミックス | 1mL |
ストレージ:
-20℃で保存, 最低保存期間は 12 月.
品質管理:
この製品は高品質のテストを受けており、エンドヌクレアーゼ活性がありません, エキソヌクレアーゼ活性, リボヌクレアーゼの汚染. 残留宿主ゲノムDNAは以下にあります 10 コピー.
製品の使用:
PCR法を使用したDNAの増幅; DNA配列決定.
使用手順:
- 必要なすべてのPCR反応ソリューションが、完全に溶解するまで室温に平衡化するようにします. ソリューションを徹底的に混合し、PCR反応システムを氷上にセットアップします.
- 氷浴またはクーラーにPCR反応システムをセットアップすることをお勧めします, 参照用の推奨反応システムに従います.
- ピペットを使用して、準備した反応システムを徹底的に混ぜて混ぜます, PCRチューブをキャップで密封します, 適切にラベルを付けます, 室温で一時的に遠心化されます.
- 準備したPCRチューブをに入れます PCR装置, 反応条件を設定します, PCR反応を開始します.
推奨反応システム:
試薬 | 25µLシステムボリューム | 最終濃度 |
2×taq pcrマスターミックス | 12.5μL | 1× |
プライマーI (10μM) | 0.5-2.5μL | 0.2-1.0μM |
ファーストⅡ (10μM) | 0.5-2.5μL | 0.2-1.0μM |
テンプレートDNA | 1必要に応じてμL | — |
ああ2○ | 25μLまで | — |
反応条件:
通常の状況下で, 反応には二段階法を使用できます. 2段階の増幅が満足のいくものではない場合, 3 ステップの方法を使用して PCR 反応プログラムをセットアップできます。. cDNAテンプレートにおける標的遺伝子の存在量の不確実性を考慮する, 使用することをお勧めします 35-38 初期増幅のサイクルと増幅結果に基づいてサイクル数を調整します.
方法・手順 | 時間設定 | サイクル |
95℃ (変性前) | 2-5分 | 1 |
95℃ (変性) | 10秒 | 28-40サイクル
(プラスミドまたはゲノムテンプレート:28-35サイクル; cDNAテンプレート:30-40サイクル) |
55℃-60℃ (アニーリング) | 30秒 | |
72℃ (拡大) | 1分 / 1-3KB | |
72℃ (最終拡張機能) | 5-10分 | 1 |
4℃/16 ℃(ホールド) | ∞ | — |
注記: 反応条件は、実際の要件に従って調整および最適化できます.
予防:
- 拡張時間は、PCR積の長さやGC含有量などの要因に基づいて調整できます. 製品のkbあたりの延長時間は、テンプレートの複雑さと密接に関連しています: 単純なテンプレートが必要です 20 秒, 典型的なテンプレートが必要です 30 秒, 複雑なテンプレートが必要です 1 分.
- PCR反応のセットアップは、テンプレートなどのさまざまな条件に合わせて調整する必要があります, プライマー, PCR製品の長さ, およびGCコンテンツ. プライマーの最終濃度は通常、0.2〜1.0μmの範囲内にあります. DNAテンプレート濃度はそれに応じて調整できます. 複雑なテンプレートまたは高いGCコンテンツ用, プレナチュレーション前/変性または延長時間を延長し、変性/アニーリング温度を上げることをお勧めします.
- 増幅の前後に指定されたエリアとピペットを使用します, 手袋を着用する, そして頻繁に変更する. PCR反応終了後, 反応チューブをすぐに開かないでください. 開口部を開く前に4°Cまたは-20°Cで十分に冷却できるようにして、実験室環境へのPCR製品汚染のリスクを最小限に抑える.
*OEM用, 営業担当者に連絡してください
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