Solarbio Восстановленный глутатион (ГШ) Набор для анализа содержания

Уменьшенный глутатион (ГШ) Набор для анализа содержания

Примечание: Перед тестированием возьмите два или три разных образца для прогнозирования..

Операционное оборудование: Спектрофотометр/считыватель микропланшета

Номер каталога: BC1175

Размер: 100Т/96С

Компоненты:

Реагент I: 100 мл×1. Хранить при 4℃.

Реагент II: 20 мл×1. Хранить при 4℃.

Реагент III: 8 мл×1. Хранить при 4℃, Защитите от света.

Стандартный: Пудра 10 мг × 1. Хранить при 4℃, Защитите от света.

Описание продукта

Глутатион - это естественный трипептид, состоящий из глутаминовой кислоты (Глю), цистеин (Cys) и глицин (Гли). Это своего рода соединение, содержащее сульфгидрил (-Ш.Х.), который широко существует в тканях животных, растительная ткань, микроорганизм, и дрожжи. Глутатион может реагировать с 5,5′-дитиобис-(2-нитробензойная кислота) (Dtnb) Для получения 2-нитро-5-меркаптбензойной кислоты и глутатион дисульфид (ГССГ). 2-нитро-5-меркаптбензойная кислота является желтым продуктом, с максимальным поглощением в 412 нм.

Технические характеристики

Минимальный предел обнаружения：3.763 мкг/мл

Линейный диапазон：12.5-400 мкг/мл

Требуемые реагенты и оборудование, которые не входят в комплект поставки

Аналитический баланс, ступка/гомогенизатор, Низкая температура центрифуга, водяная баня, регулируемая пипетка, Спектрофотометр/считыватель микропланшета, микрокланическая кювета или 96 хорошо плоская тарелка и дистиллированная вода.

Процедура

я. Базовые приготовления

1. Образец ткани

Дважды промойте свежие ткани PBS, затем добавьте 0.1 G ткани животных/растений в гомогенизатор (Гомогенизатор был промыт реагентом I и помещен на лед перед использованием). Добавлять 1 мл реагента I (Доля ткани и реагентов может быть постоянной), полностью шлифовать на льду (Использование жидкого азота будет иметь лучший эффект шлифования). Центрифуга в 8000 ×g для 10 минут при 4℃, Возьмите супернатант и поместите его в 4 ℃ для тестирования. (Если тест не может быть выполнен временно, Супернатант можно хранить в -80 ℃ для 10 дни)

2. Образец крови

Плазма: Образец центрифугируется в 600 ×g для 10 минут при 4℃. Поглощение верхней плазмы в другую трубку с добавлением того же реагента объема I. Центрифуга в 8000 ×g для 10 минут при 4℃, Возьмите супернатант и поместите его в 4 ℃ для тестирования. (Если тест не может быть выполнен временно, Супернатант можно хранить в -80 ℃ для 10 дни)

Клетка крови: Образец центрифугируется в 600 ×g для 10 минут при 4℃. Отбросить верхнюю плазму, вымыть с тремя разголами PBS для 3 раз (Перезаднать клетку крови с PBS, центрифуга в 600 ×g для 10 минуты), Добавьте равный объем реагента I. После смешивания, он помещен в 4 ℃ для 10 минуты. Центрифуга в 8000 ×g для 10 минуты, Возьмите супернатант и поместите его в 4 ℃ для тестирования. (Если тест не может быть выполнен временно, Супернатант можно хранить в -80 ℃ для 10 дни)

3. Клетка образец

Сбор ячейки должен быть не менее 106, а затем дважды промойте ее PBS (Повторная ячейка с PBS, центрифуга в 600 ×g для 10 минуты). Объем реагента, который я добавил, в три раза превышает объем осаждения клеток, чтобы повторно высказывать клетки. Повторное замораживание и оттаивание 2–3 раза (Предполагается, что заморожен в жидком азоте, растворенная в 37 ℃ водяной бане). Центрифуга в 8000 ×g для 10 минуты, Возьмите супернатант и поместите его в 4 ℃ для тестирования. (Если тест не может быть выполнен временно, Супернатант можно хранить в -80 ℃ для 10 дни)

II. Процедура

1. Предварительный нагрев спектрофотометра/считывателя микропланшетов для 30 минуты, отрегулировать длину волны, чтобы 412 нм, установить ноль с дистиллированным
2. Разогрейте реагент II в 37 ℃ (млекопитающие) или 25℃ (другие виды) водяная баня для 30
3. Определение пустой трубки: Возьмите микроэлементную кювету, добавлять 20 мкл дистиллированной воды, 140 мкл реагента II, 40 мкл реагента III в свою очередь, хорошо перемешать, место для 2 минуты, и измерения 412 nm поглощение Ab.
4. Создание стандартной кривой

Взвешивать 1 мг стандарта и растворить его с помощью 1 мл дистиллированной воды для получения концентрации 1 мг/мл. Принять соответствующее решение, чтобы подготовить стандарты с концентрацией 200 мкг/мл, 100 мкг/мл, 50 мкг/мл, 25 мкг/мл и 12.5 мкг/мл (Разбавить реагент I за десять раз, прежде чем разбавить стандартный раствор).

Принять 1.5 ML EP Tube и добавьте 20 мкл стандарта, 140 мкл реагента II и 40 мкл реагента III в свою очередь. После того, как каждая трубка равномерно смешана, разрешено стоять за 2 минуты. Измерьте поглощение при 412 нм, и поглощение минус AB как абсцисса. Сделайте стандартную кривую в соответствии с поглощением (Икс) и концентрация (й, мкг/мл).

5. Образец трубки: Возьмите микроэлементную кювету, добавлять 20 мкл образца, 140 мкл реагента II, 40 мкл реагента III в свою очередь, хорошо перемешать, а потом стоять за 2 Протокол, чтобы проверить поглощение атата 412 нм, ΔA = в — АБ.
6. Работа считывателя микропланшетов такая же, как у спектрофотометра, и операция так же быстра

III. Расчеты

Согласно стандартной кривой, Возьмите образец ΔA в формулу(Икс), и рассчитать концентрацию образца y (мкг/мл).

• Концентрация белка

ГШ (мкг/мг прот)= y × vrv ÷ vrv ÷ cpr = y ÷ cpr

• Вес образца

ГШ (мкг/г)= y × vrv ÷(VRV ÷ VSV × W.)= y ÷ w

• Количество ячеек

ГШ (мкг/104cell)= y × vrv ÷(VRV ÷ VSV × N.)= y ÷ n

• Объем решения GSH (мкг/мл)= 2y

Н: Количество ячеек, 106;

VSV: Общий объем супернатанта, 1 мл；

Шнур: Объем супернатанта добавлен в систему реакции, 20 мкл = 0,02 мл； Вт: Вес образца, г;

КПР: Концентрация белка в супернатанте, мг/мл.

2: Объем плазмы (клетки крови) разбавляется один раз.

Примечание:

1. Выборка должна быть полностью гомогенизирована. Если тест не может быть выполнен временно, он может храниться AT-80 ℃.
2. Стандартный: Снижение глутатиона готовится, когда раствор будет
3. Если содержание GSH в выборке неясно, Разбавить образец для нескольких градиентов до
4. Потому что реагент я содержат белковой осадок, Супернатант не может быть использован для определения концентрации белка. Если содержание белка необходимо определить, Возьмите другую ткань.

Ссылка:

• Альперт А., Гилберт Х ф. Обнаружение окисленного и восстановленного глутатиона с помощью рециркуляции постколоночной реакции[Дж]. Аналитическая биохимия, 1985, 144(2):553-562.
• Owens C W I, Belcher R v. Колориметрический микрометод для определения глутатиона[Дж]. Биохимический журнал, 1965, 94(3):

Сопутствующие товары：

BC1180/ BC1185 окисленная глутатион (GSSG) набор для анализа

BC1190/ BC1195 Глутатион Пероксидаза Комплект

BC1150/ BC1155 окисленная тиоредоксинредуктаза (Trxr) Набор для анализа

BC1210/ BC1215 γ-глутамат-цистеин лигаза (ГЛОН) Анализ ки