Соларбио перекись водорода (H2O2) Набор для анализа содержания

Атрибут	Подробности
Примечание	Перед тестированием возьмите два или три разных образца для прогнозирования.
Инструмент обнаружения	Спектрофотометр / Считыватель микропланшетов
Кот нет	BC3595
Размер	100Т/96С

Компоненты:

Реагент I: Ацетон 100мл×1. Хранение при 4℃. (Самостоятельный реагент)

Реагент Ⅱ: Порошок×1. Хранение при 4℃. Рабочее решение: Добавьте 3 мл концентрированной соляной кислоты. (37%) перед использованием, полностью растворился. Неиспользованные реагенты хранятся в 4 °С.

Реагент Ⅲ: 6мл×1. Хранение при 4℃.

Реагент Ⅳ: 30мл×1. Хранение при 4℃.

Стандартный: 1мл×1, 1ммоль/мл стандартный раствор H2O2. Хранение при 4℃.

Описание продукта:

H2O2 — наиболее распространенная активная молекула кислорода в организмах.. Он в основном производится в результате катализа СОД и ХОД и разлагается в результате катализа КАТ и ПОД.. H2O2, который является не только одним из важных активных веществ кислорода, но и центр взаимного превращения активного кислорода. С одной стороны, H2O2 может прямо или косвенно окислять внутриклеточные нуклеиновые кислоты., белки и другие биологические макромолекулы, и повреждают клеточные мембраны, тем самым ускоряя старение и распад клеток. С другой стороны, H2O2 также является ключевым регуляторным фактором во многих экстренных окислительных реакциях..

H2O2 и сульфат титана образуют желтый комплекс пероксида титана с характерным поглощением при 415 нм.

Требуемые реагенты и оборудование, которые не входят в комплект поставки.

Спектрофотометр/считыватель микропланшетов, настольная центрифуга, регулируемая пипетка, микро-стеклянная кювета/96-луночный планшет с плоским дном, пипетка для переноса, ацетон концентрированная серная кислота (37% HCl), раствор и лед.

Процедура:

я. Извлечение образца:

1. 1. Бактериальный или клеточный образец: собрать образец бактерий или клеток для центрифуги, выбросить супернатант; предложенный 5 миллиона с 1 мл регента I, расщепление бактерий и клеток с помощью ультразвука (власть 20%, время работы 3с, интервал 10 с, для 30 раз); центрифуга при 8000 г и 4 ℃ для 10 мин, супернатант помещают на лед для анализа.
   2. Салфетка: взять 0,1 г ткани добавить 1 мл регент я, полностью шлифовать на льду. Центрифуга в, 8000g и 4 ℃ для 10 мин, супернатант помещают на лед для анализа.
   3. сыворотка: в зависимости от доли на 100 мкл сыворотки (плазма) добавить 0,9 мл регента I, хорошо перемешать. Центрифуга при 8000g и 4℃ для 10 мин, супернатант помещают на лед для анализа.

II. Определение процедура:

• Предварительный нагрев спектрофотометра/считывателя микропланшетов для 30 мин, отрегулировать длину волны, чтобы 415 нм, установить ноль с помощью дистиллированной воды.
• Инкубируйте раствор Ⅱ, Ⅲ и Ⅳ при 37 ℃(млекопитающие) или 25℃ (другие животные) водяная баня более чем 10 мин минут.
• Стандартное рабочее решение: При использовании 96-луночного планшета, разбавьте стандартный раствор с концентрацией 1 ммоль/мл до стандартного раствора с концентрацией 2 мкмоль/мл ацетоном., и используйте колориметрический метод следового стекла для разбавления стандартного раствора 1 ммоль/мл до стандартного раствора 1 мкмоль/мл.
• Добавьте реагенты из следующего списка (реакция в EP-пробирке):

Реагент (мкл)	Пробирка (В)	Стандартная трубка (КАК)	Контрольная трубка (переменного тока)
Образец	250
Стандартное рабочее решение		250
Регент I			250
Регент II	25	25	25
Регент III	50	50	50
4000г, Центрифуга при комнатной температуре для 10 минут, отбросить супернатант.
Регент IV	250	250	250

Добавьте Регент Ⅳ, чтобы растворить осадок. (на этом этапе можно удалить растительный пигмент ацетоном 3-5 раз), и поместите его при комнатной температуре на 5 мин, Передача 200 мкл в стеклянную микрокювету или 96-луночный планшет и измерьте поглощение при 415 нм. Контрольную пробирку необходимо протестировать только один или два раза.. Вычислить ∆AT =AT-AC, ∆AS=AS-AC.

III. Расчет (Для микропланшета читатель)

А. 96-хорошо тарелка

• Количество ячеек

H2O2(мкмоль /104 клетка) = ∆AT÷(∆AS÷C)×Vs÷(500×Vs÷Ve)=0,004 × ∆AT ÷ ∆AS

• Вес образца

H2O2(мкмоль/г)= ∆AT÷(∆AS÷C)×V1÷(Vs÷Ve×W)= 2×∆AT ÷ ∆AS ÷ W

• Концентрация белка

H2O2(мкмоль/мг прот)= ∆AT ÷(∆AS÷C)×Vs÷(Cpr×Vs)= 2×∆AT÷ ∆AS ÷ Cpr

• сыворотка (плазма)объем

H2O2(мкмоль/мл)= ∆AT ÷(∆AS÷C)×10=20 × ∆AT÷ ∆AS

500: количество клеток или бактерий, 104;

С: концентрация стандартного раствора H2O2, 2мкмоль/мл;

Против: объем пробы, 0.25 мл; Вт: Вес образца, г;

ве: объем добычи, 1 мл;

КПР: концентрация белка в образце, мг/мл;

10: многократное разведение сыворотки. [0.1мл сыворотки (плазма)+0.9мл регент I]÷0,1 мл сыворотки(плазма)=10.

Б. микро стекло кювета:

Измените концентрацию стандарта C-2 мкмоль/мл в приведенной выше формуле на C-1 мкмоль/мл для расчета..

Примечание:

1. Как решение, Я легко вспыльчив, Решение: Перед использованием меня необходимо предварительно охладить.. При измельчении его необходимо измельчать на льду..
2. Раствор в этом наборе легко улетучивается.. Пожалуйста, возьмите с собой одноразовые перчатки и маски..
3. Если значение оптической плотности образца превышает 1.1, перед выполнением измерения рекомендуется разбавить образец реагентом I..

Экспериментальные примеры:

1. Брать 0.1 г сердца и добавить 1 мл реагента I для обработки проб. После центрифугирования отобрать весь супернатант, действовать в соответствии с процедурой определения. После определения с 96 колодезная плоскодонная тарелка, вычислить ∆AT=AT-AC=0,083-0,046=0,039, ∆AS=AS-AC=0,824-0,046=0,778. Содержание рассчитывается по массе образца..

H2O2(мкмоль/г) =2×∆AT ÷ ∆AS ÷ W =1 мкмоль/г.

2. Брать 0.1 г чая и добавьте 1 мл реагента I для обработки проб. После центрифугирования отобрать весь супернатант, действовать в соответствии с процедурой определения. После определения с 96 колодезная плоскодонная тарелка, вычислить ∆AT=AT-AC=0,258-0,003=0,255, ∆AS=AS-AC=0,637-0,003=0,634. Содержание рассчитывается по массе образца..

H2O2(мкмоль/г) =2×∆AT ÷ ∆AS ÷ W =4,5 мкмоль/г.

Рекомендации：

• Саттерфилд С Н, Боннелл А. Вмешательство в метод сульфата титана для пероксида водорода.[Дж].

Аналитическая химия, 1955, 27(7): 1174-1175.

• Амин В М, Олсон Н Ф. Спектрофотометрическое определение перекиси водорода в молоке.[Дж]. Журнал молочной науки, 1967, 50(4):461-464.
• Сима Ю Х, Яо Дж М, любовь да с, и другие. Вариации экспрессии перекиси водорода и каталазы в яйцах Bombyx во время начала и прекращения диапаузы[Дж]. Архив биохимии и физиологии насекомых, 2011, 77(2): 72-80.

Сопутствующие товары:

BC0020/BC0025 Малоновый диальдегид(МДА) Набор для анализа содержания

BC1090/BC1095 Ксантиноксидаза(ХОД) Набор для анализа активности

BC0690/BC0695 Глюкозооксидаза(БОГ) Набор для анализа активности

Технические характеристики:

Предел обнаружения ：0.0027 мкмоль/мл

Линейный диапазон：0.0195-3 мкмоль/мл