Solarbio過氧化氫 (雙氧水) 含量測定試劑盒

屬性	細節
筆記	測試前取兩個或三個不同的樣本進行預測
檢測儀器	分光光度計 / 酶標儀
目錄號	BC3595
尺寸	100T/96S

成分:

試劑一: 丙酮 100mL×1. 4℃保存. (自備試劑)

試劑Ⅱ: 粉末×1. 4℃保存. 工作溶液: 加入3mL濃鹽酸 (37%) 使用前, 完全溶解. 未使用的試劑儲存於 4 ℃.

試劑Ⅲ: 6毫升×1. 4℃保存.

試劑IV: 30毫升×1. 4℃保存.

標準: 1毫升×1, 1mmol/mL H2O2 標準溶液. 4℃保存.

產品描述:

H2O2是生物體中最常見的活性氧分子. 主要由SOD和XOD催化產生，並由CAT和POD催化降解. 雙氧水, 它不僅是重要的活性氧之一, 也是活性氧相互轉化的樞紐. 一方面, H2O2可以直接或間接氧化細胞內核酸, 蛋白質和其他生物大分子, 並損傷細胞膜, 從而加速細胞的老化與崩解. 另一方面, H2O2 也是許多氧化緊急反應的關鍵調節因素.

H2O2 和硫酸鈦生成黃色過氧化鈦絡合物，其特徵吸收為 415 奈米.

需要但未提供的試劑和設備.

分光光度計/酶標儀, 桌上型離心機, 可調式移液器, 微型玻璃比色皿/96孔平底板, 移液管, 丙酮 濃硫酸 (37% 鹽酸), 砂漿和冰.

程式:

我. 樣品萃取:

1. 1. 細菌或細胞樣本: 收集細菌或細胞樣本進行離心, 棄去上清液; 建議 5 1mL Regent I 百萬, 透過超音波破碎細菌和細胞 (力量 20%, 工作時間3s, 間隔10秒, 為了 30 次); 8000g、4℃離心 10 分分鐘, 上清液置於冰上待測.
   2. 組織: 取0.1g組織加入 1 毫升攝政一號, 在冰上充分研磨. 離心機在, 8000g和4℃ 10 分分鐘, 上清液置於冰上待測.
   3. 血清: 依每100μL血清中的比例 (電漿) 加入 0.9mL 試劑 I, 攪拌均勻. 8000g、4℃離心 10 分分鐘, 上清液置於冰上待測.

二. 決心 程式:

• 預熱分光光度計/酵素標儀 30 分分鐘, 調整波長至 415 奈米, 用蒸餾水調零.
• 孵育液Ⅱ, Ⅲ、Ⅳ 37℃(哺乳動物) 或25℃ (其他動物) 水浴超過 10 分鐘 分鐘.
• 標準工作溶液: 如果使用 96 孔板, 用丙酮將1mmol/mL標準溶液稀釋至2μmol/mL標準溶液, 用微量玻璃比色法將1mmol/mL標準溶液稀釋成1μmol/mL標準溶液
• 加入如下清單的試劑 (EP管內反應):

試劑 (微升)	試管 (在)	標準管 (作為)	控制管 (交流電)
樣本	250
標準工作溶液		250
攝政一世			250
攝政二世	25	25	25
攝政三世	50	50	50
4000G, 室溫離心機 10 分分鐘, 棄去上清液.
攝政四世	250	250	250

加入Regent IV溶解沉澱 (此步驟可以用丙酮去除植物色素 3-5 次), 並將其置於室溫下 5 分分鐘, 轉移 200 μL 至微型玻璃比色皿或 96 孔板中，並測量吸光度 415 奈米. 對照管只需測試一兩次. 計算ΔAT =AT-AC, ΔAS=AS-AC.

三、. 計算 (微孔板用 讀者)

A. 96-出色地 盤子

• 細胞數量

雙氧水(微摩爾 /104 細胞) = ΔAT÷(ΔAS÷C)×Vs÷(500×Vs÷Ve)=0.004 × ΔAT ÷ ΔAS

• 樣品重量

雙氧水(微摩爾/克)= ΔAT÷(ΔAS÷C)×V1÷(Vs÷Ve×W)= 2×ΔAT ÷ ΔAS ÷ W

• 蛋白質濃度

雙氧水(μmol/mg蛋白質)= ΔAT ÷(ΔAS÷C)×Vs÷(Cpr×Vs)= 2×ΔAT÷ ΔAS ÷ Cpr

• 血清 (電漿)體積

雙氧水(微摩爾/毫升)= ΔAT ÷(ΔAS÷C)×10=20 × ΔAT÷ ΔAS

500: 細胞或細菌數量, 104;

C: H2O2標準溶液濃度, 2微摩爾/毫升;

VS: 樣品量, 0.25 毫升; 瓦: 樣品重量, G;

維: 提取體積, 1 毫升;

心肺復甦: 樣品蛋白濃度, 毫克/毫升;

10: 血清稀釋倍數. [0.1血清毫升數 (電漿)+0.9mL 試劑 I]÷0.1mL 血清(電漿)=10.

乙. 微玻璃 比色皿:

將上式中標準品C-2μmol/mL的濃度改為C-1μmol/mL進行計算.

筆記:

1. 作為解決方案, I 很容易波動, 解決方法 使用前必須預冷. 研磨時必須在冰上研磨.
2. 該試劑盒中的溶液很容易揮發. 請攜帶一次性手套和口罩.
3. 如果樣品的吸光度值大於 1.1, 建議在測量前用試劑 I 稀釋樣品.

實驗實例:

1. 拿 0.1 g 心並添加 1 用於樣品處理的試劑 I 的毫升數. 離心後取全部上清液, 按確定程序進行. 確定後 96 井平底板, 計算ΔAT=AT-AC=0.083-0.046=0.039, ΔAS=AS-AC=0.824-0.046=0.778. 含量以樣品質量計算.

雙氧水(微摩爾/克) =2×ΔAT ÷ ΔAS ÷ W =1 μmol/g.

2. 拿 0.1 克茶並添加 1 用於樣品處理的試劑 I 的毫升數. 離心後取全部上清液, 按確定程序進行. 確定後 96 井平底板, 計算ΔAT=AT-AC=0.258-0.003=0.255, ΔAS=AS-AC=0.637-0.003=0.634. 含量以樣品質量計算.

雙氧水(微摩爾/克) =2×ΔAT ÷ ΔAS ÷ W =4.5 μmol/g.

參考：

• 薩特菲爾德 CN, Bonnell A 幹擾硫酸鈦法測定過氧化氫[J].

分析化學, 1955, 27(7): 1174-1175.

• 阿明VM, 奧爾森·N·F. 分光光度法測定牛奶中的過氧化氫[J]. 乳品科學雜誌, 1967, 50(4):461-464.
• 司馬玉華, 姚建明, 愛YS, 等人. 滯育開始和終止期間家蠶卵中過氧化氫和過氧化氫酶表現的變化[J]. 昆蟲生物化學和生理學檔案, 2011, 77(2): 72-80.

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技術規格:

檢測極限 ：0.0027 微摩爾/毫升

線性範圍：0.0195-3 微摩爾/毫升