Небольшие количества ДНК из нового набора для извлечения геномов растений

1. Компоненты набора реагентов

2. Хранилище

Этот набор следует хранить при комнатной температуре. (15-25℃) в сухих условиях и может храниться в течение 12 месяцы. Колонки для экстракционной очистки ДНК можно хранить в прохладном и сухом помещении до 1 год. РНКаза А содержит консервант и может транспортироваться при комнатной температуре., но для длительного хранения, его следует хранить при -20 ℃.

3. Инструкции по использованию набора реагентов

3.1 Этот набор предназначен для исследовательских целей в области молекулярной биологии и не должен использоваться для диагностики или лечения заболеваний..

3.2 Некоторые компоненты набора содержат раздражители.; желательно принять необходимые меры предосторожности (например, носить защитную одежду и очки).

3.3 Для использования этого комплекта требуется дополнительное оборудование, такое как высокоскоростная центрифуга., водяная баня (металлическая ванна), вихревой смеситель, безводный этанол, жидкий азот, хлороформ, стерильная деионизированная вода, и EP трубки.

4. Знакомство с набором реагентов

The new plant genome очистка ДНК kit provides a rapid method for DNA purification. It effectively precipitates DNA with specific reagent buffers II and C, collecting high-purity DNA through adsorption columns.

This kit is widely applicable for isolating samples from plant tissues and fungi, enabling the extraction of total DNA from plants and fungi within 30 минуты. The extraction process doesn’t involve toxic reagents like phenol-chloroform. Выделенная ДНК может быть непосредственно использована для последующих экспериментов, таких как ПЦР и Саузерн-блоттинг.

5. Экспериментальные принципы и процедуры：

6. Процесс экстракции

Меры предосторожности перед началом эксперимента:

А. Reagent Buffer I and Reagent Buffer C tend to precipitate at low temperatures. It is recommended to heat them at 65°C for 5 minutes until the precipitates dissolve before normal usage.

Б. Before using Промывной буфер 1, add the specified amount of absolute ethanol as indicated on the reagent bottle label and mark a check (√) on the label to indicate the addition of absolute ethanol.

С. The Elution Buffer is a 0.1х ТЕ решение содержащий минимальное количество ЭДТА. Если ЭДТА повлияет на последующие эксперименты, it is recommended to substitute the Elution Buffer with sterile deionized water.

1. Образец обработки:

А. Сбор и хранение материалов

If freshly collected materials cannot be immediately used, place them in liquid nitrogen for cooling and finally store at -80°C. Высушенные материалы можно хранить при комнатной температуре..

Б. If conditions permit, collect fresh materials whenever possible, as fresh materials contain fewer polysaccharides and polyphenols.

С. При сборе грибов из жидкой культуры, separate the liquid and collect the fungal cells by centrifugation.

2. Weigh around 100 mg of fresh samples or not exceeding 20 mg of dry material and grind it with liquid nitrogen.

(Примечание: Different sample amounts may vary; it is advisable to optimize the sample amount through pre-experimental trials.)

3. Добавлять 400μl Reagent Buffer I and 10μl RNaseA (10 мг/мл), ensuring there are no clumps in the ground sample. Clumps are difficult to lyse, reducing the DNA yield. Также, do not mix Reagent Buffer I and RNaseA before usage.

4. Инкубируйте при 65°C в течение 5 минуты, gently invert the mixture 2-3 раз. This step is used for cell lysis. If samples are difficult to lyse, extend the incubation time, but not beyond 30 минуты.

5. Добавлять 130μl Reagent Buffer II и хорошо перемешать, then ice-bathe for 5 минуты (this step is used for precipitating polysaccharides and proteins).

6. Центрифугируйте лизат для 5 минут в 14,000 об/мин (20,000×г).

(Примечание: Some plant materials may contain a lot of viscous substances at this step, which can shear DNA in the subsequent steps. Поэтому, the ideal state is to remove these substances during this step. После центрифугирования, перенесите супернатант в новую центрифужную пробирку. If there is a significant amount of flocculent material in the supernatant after centrifugation, it indicates that the initial sample quantity was too large. Consider reducing the initial sample amount.)

7. Carefully transfer the obtained liquid to a new centrifuge tube.

(Примечание: Approximately 450μl of liquid can be transferred; для некоторых видов, it may be less than 450μl.)

8. Добавьте равный объем Реагентный буфер C and an equal volume of absolute ethanol to the lysate and mix well.

(Например: Add 450μl of Reagent Buffer C, then add 450μl of absolute ethanol. If the volume of the lysate is less than 450μl, reduce the amount of Reagent Buffer C proportionally. Adding Reagent Buffer C will cause slight precipitation, но это не повлияет на последующие эксперименты.)

9. Добавьте полученную жидкость в колонку для экстракционной очистки ДНК. (набор) (примерно 650-700 мкл каждый раз), centrifuge at greater than 8,000 об/мин для 1 минута, выбросить собранные отходы, и повторно вставьте пробирку для сбора в колонку очистки для следующего шага..

10. Повторить шаг 9, add the remaining liquid to the DNA extraction purification column (набор), centrifuge at greater than 8,000 об/мин для 1 минута, discard waste and the collection tube.

11. Поместите колонку для очистки экстракции ДНК (набор) в коллекторную трубку, добавлять 300мкл промывочного буфера 1,centrifuge at greater than 8,000 об/мин для 1 минута, discard waste, и поместите колонку для экстракционной очистки ДНК (набор) обратно в трубку для следующего шага.

(Примечание: Confirm the addition of absolute ethanol in Wash Buffer 1.)

12. Добавлять 500мкл промывочного буфера 1 в колонку очистки экстракции ДНК (набор), центрифуга в 14,000 об/мин (20,000×г) для 2 минуты, extend centrifugation time appropriately to ensure the membrane is adequately dry.

13. Поместите колонку для очистки экстракции ДНК (набор) в новую центрифужную пробирку, leave it uncovered, и инкубировать при 65 ° С для 2 минуты. Extend this step as needed to evaporate ethanol to prevent ethanol residue from affecting downstream experiments.

14. Пипетка 100мкл элюирующего буфера на мембрану колонки, центрифуга в 12,000 об/мин для 2 минуты.

(Примечание: 1. Using 50μl of Elution Buffer to elute DNA can increase DNA concentration but reduce the overall DNA yield; 2. The eluate containing DNA can be reapplied to the DNA extraction purification column and centrifuged at 12,000 об/мин для 2 minutes again to increase DNA yield.)