Small Amounts of DNA from Novel Plant Genomes Extraction Kit

1. 試薬キットのコンポーネント

仕様	50T	100T
猫. いいえ.	SN0205	SN0206
DNA抽出カラム (セット)	50 (セット)	100 (セット)
Reagent Buffer I	20 ミリリットル	2×20 ミリリットル
Reagent Buffer II	15 ミリリットル	15 ミリリットル
Reagent Buffer C	30 ミリリットル	2 × 30 ミリリットル
溶出バッファー 1	15 ミリリットル	2 × 15 ミリリットル
洗浄バッファー	20 ミリリットル	20 ミリリットル
RNase A	1ミリリットル	1ミリリットル
取扱説明書	1	1

2. ストレージ

このキットは室温で保存する必要があります (15-25℃) 乾燥した状態で、保存できます 12 月. DNA抽出精製カラムは、までのためにクールで乾燥した環境に保存できます 1 年. RNaseAには防腐剤が含まれており、室温で輸送できます, しかし、長期保管の場合, -20℃に保持する必要があります.

 

3. 試薬キットを使用するための指示

3.1 このキットは分子生物学の研究目的を目的としており、疾患の診断や治療に使用すべきではありません.

3.2 キットの一部のコンポーネントには刺激物が含まれています; 必要な予防策を講じることをお勧めします (保護服やゴーグルを着用するなど).

3.3 このキットを使用するには、高速遠心分離機などの追加の機器が必要です, 水浴 (メタルバス), 渦ミキサー, 無水エタノール, 液体窒素, クロロホルム, 滅菌脱イオン水, およびEPチューブ.

4. 試薬キットの紹介

The new plant genome DNA精製 kit provides a rapid method for DNA purification. It effectively precipitates DNA with specific reagent buffers II and C, collecting high-purity DNA through adsorption columns.

This kit is widely applicable for isolating samples from plant tissues and fungi, enabling the extraction of total DNA from plants and fungi within 30 分. The extraction process doesn’t involve toxic reagents like phenol-chloroform. 抽出されたDNAは、次のような下流の実験に直接使用できます PCR and Southern blotting.

5. 実験原則と手順：

6. 抽出プロセス

実験を開始する前の注意事項:

あ. Reagent Buffer I and Reagent Buffer C tend to precipitate at low temperatures. It is recommended to heat them at 65°C for 5 minutes until the precipitates dissolve before normal usage.

B. Before using 洗浄バッファー 1, add the specified amount of absolute ethanol as indicated on the reagent bottle label and mark a check (√) on the label to indicate the addition of absolute ethanol.

C. The Elution Buffer is a 0.1X TEソリューション 最小限のEDTAを含む. EDTAがその後の実験に影響を与える場合, it is recommended to substitute the Elution Buffer with sterile deionized water.

1. サンプル処理:

あ. マテリアルコレクションとストレージ

収集したばかりの材料をすぐに使用できない場合, place them in liquid nitrogen for cooling and finally store at -80°C. 乾燥材料は室温で保管できます.

B. If conditions permit, collect fresh materials whenever possible, as fresh materials contain fewer polysaccharides and polyphenols.

C. 液体培養から菌を集めるとき, separate the liquid and collect the fungal cells by centrifugation.

2. Weigh around 100 mg of fresh samples or not exceeding 20 mg of dry material and grind it with liquid nitrogen.

(注記: Different sample amounts may vary; it is advisable to optimize the sample amount through pre-experimental trials.)

3. 追加 400μl Reagent Buffer I and 10μl RNaseA (10 mg/ml), ensuring there are no clumps in the ground sample. Clumps are difficult to lyse, reducing the DNA yield. また, do not mix Reagent Buffer I and RNaseA before usage.

4. 65°Cでインキュベートします 5 分, gently invert the mixture 2-3 回. This step is used for cell lysis. If samples are difficult to lyse, extend the incubation time, but not beyond 30 分.

5. 追加 130μl Reagent Buffer II よく混ぜます, then ice-bathe for 5 分 (this step is used for precipitating polysaccharides and proteins).

6. 溶解物の遠心 5 数分 14,000 RPM (20,000×g).

(注記: Some plant materials may contain a lot of viscous substances at this step, which can shear DNA in the subsequent steps. したがって, the ideal state is to remove these substances during this step. 遠心分離後, transfer the supernatant to a new centrifuge tube. If there is a significant amount of flocculent material in the supernatant after centrifugation, it indicates that the initial sample quantity was too large. Consider reducing the initial sample amount.)

7. Carefully transfer the obtained liquid to a new centrifuge tube.

(注記: Approximately 450μl of liquid can be transferred; いくつかの種の場合, it may be less than 450μl.)

8. 等量を追加します Reagent Buffer C and an equal volume of absolute ethanol to the lysate and mix well.

(例えば: Add 450μl of Reagent Buffer C, then add 450μl of absolute ethanol. If the volume of the lysate is less than 450μl, reduce the amount of Reagent Buffer C proportionally. Adding Reagent Buffer C will cause slight precipitation, but it won’t affect subsequent experiments.)

9. Add the obtained liquid to the DNA extraction purification column (キット) (毎回約650〜700μl), centrifuge at greater than 8,000 の回転数 1 分, 収集された廃棄物を廃棄します, and re-insert the collection tube into the purification column for the next step.

10. ステップを繰り返します 9, add the remaining liquid to the DNA extraction purification column (キット), centrifuge at greater than 8,000 の回転数 1 分, discard waste and the collection tube.

11. Place the DNA extraction purification column (キット) into the collection tube, 追加 300洗浄バッファーμl 1,centrifuge at greater than 8,000 の回転数 1 分, discard waste, and place the DNA extraction purification column (キット) back into the tube for the next step.

(注記: Confirm the addition of absolute ethanol in Wash Buffer 1.)

12. 追加 500洗浄バッファーμl 1 to the DNA extraction purification column (キット), で遠心分離する 14,000 RPM (20,000×g) のために 2 分, extend centrifugation time appropriately to ensure the membrane is adequately dry.

13. Place the DNA extraction purification column (キット) 新しい遠心チューブに, leave it uncovered, and incubate at 65°C for 2 分. Extend this step as needed to evaporate ethanol to prevent ethanol residue from affecting downstream experiments.

14. ピペット 100μLの溶出緩衝液 onto the column membrane, で遠心分離する 12,000 の回転数 2 分.

(注記: 1. Using 50μl of Elution Buffer to elute DNA can increase DNA concentration but reduce the overall DNA yield; 2. The eluate containing DNA can be reapplied to the DNA extraction purification column and centrifuged at 12,000 の回転数 2 minutes again to increase DNA yield.)