2× taq ПЦР Master Mix (с красителем)
предмет номер: E002 Спецификация:1ML Storage: Хранить при -20°C.
Внедрение продукции:
2x Taq PCR Master Mix (с красителем) представляет собой предварительно смешанный раствор при вдвое превышающей концентрацию ДНК -полимеразы, ПЦР буфер, дНТФ смесь, и индикаторы. При использовании этого продукта, Просто добавьте шаблон и праймеры в предварительно смешанное решение, и завершить объем DDH2O для реакции ПЦР. Это упрощает эксплуатационные этапы и снижает риск загрязнения во время процедур ПЦР. Кроме того, Прес -смешанный раствор содержит необходимые красительные реагенты для гелевого электрофореза., Включение прямого гелевого электрофореза после ПЦР. Этот продукт предлагает высокую чувствительность, сильная специфичность, и широкий линейный диапазон, позволяя получить более точную количественную оценку генов -мишеней. Продукты ПЦР, амплифицированные с использованием этого продукта, добавляют базу на 3′ конец, облегчение клонирования в T -векторы.
Содержание продукта:
Компоненты | E002 |
2× Taq PCR Master Mix (с красителем) | 1мл |
Хранилище:
Хранить при -20°C., с минимальным сроком годности 12 месяцы.
Контроль качества:
Этот продукт подвергся качественному тестированию и не свободен от эндонуклеазной активности, экзонуклеазная активность, и загрязнение рибонуклеазой. Остаточная геномная ДНК -хозяина ниже 10 копии.
Использование продукта:
Усиление ДНК с использованием метода ПЦР; Определение последовательности ДНК.
Инструкции по использованию:
- Разрешить все необходимые растворы реакции ПЦР уравновешивать до комнатной температуры до полного растворения. Тщательно смешайте растворы и установите реакционную систему ПЦР на льду.
- Рекомендуется настроить реакционную систему ПЦР на ледяной ванне или в холодильнике, После рекомендуемой реакционной системы для справки.
- Тщательно пипетка и смешайте подготовленную реакционную систему, используя пипетку, Запечатайте трубки ПЦР, Обийся их соответствующим образом, и кратко центрифуга при комнатной температуре.
- Поместите приготовленные трубки ПЦР в ПЦР-машина, Установить условия реакции, и инициировать реакцию ПЦР.
Рекомендуемая система реакции:
Реагенты | 25icl Объем системы | Конечная концентрация |
2× Taq PCR Master Mix (с красителем) | 12.5мкл | 1× |
Грунтовка i (10мкм) | 0.5-2.5мкл | 0.2-1.0мкМ |
Primer II (10мкм) | 0.5-2.5мкл | 0.2-1.0мкМ |
ДНК шаблона | 1мкл по мере необходимости | - |
DDH2О | До 25 мкл | - |
Условия реакции:
При нормальных обстоятельствах, Двухэтапный метод может быть использован для реакции. Если двухэтапное усиление не является удовлетворительной, Трехэтапный метод может быть использован для настройки программы реакции ПЦР. Учитывая неопределенность изобилия генов -мишеней в шаблонах кДНК, рекомендуется использовать 35-38 Циклы для начальной амплификации и отрегулируйте количество циклов на основе результатов усиления.
Метод/шаги | Настройка времени | Циклы |
95℃ (Предварительная де натурация) | 2-5мин | 1 |
95℃ (Денатурация) | 10сек | 28-40Циклы
(Плазмида или геномный шаблон:28-35циклы; Шаблон кДНК:30-40циклы) |
55℃ -60 ℃ (Отжиг) | 30сек | |
72℃ (Расширение) | 1мин / 1-3КБ | |
72℃ (Окончательное расширение) | 5-10мин | 1 |
4℃/16 ℃ (удержание) | ∞ | - |
Примечание: Условия реакции могут быть скорректированы и оптимизированы в соответствии с фактическими требованиями.
Меры предосторожности:
- Время расширения может быть скорректировано на основе таких факторов, как длина и содержание GC продукта ПЦР. Время расширения на КБ продукта тесно связано со сложностью шаблона: Простые шаблоны требуют 20 секунды, Типичные шаблоны требуют 30 секунды, и сложные шаблоны требуют 1 минута.
- Настройка реакции ПЦР должна быть адаптирована к различным условиям, таким как шаблон, праймеры, Длина продукта ПЦР, и контент GC. Конечная концентрация праймеров обычно попадает в диапазон 0,2-1,0 мкм. Концентрация шаблона ДНК может быть скорректирована соответственно. Для сложных шаблонов или высокого содержания GC, Рекомендуется продлить предварительную денатурацию/денатурацию или время расширения и повысить температуру денатурации/отжига.
- Используйте назначенные области и пипетки до и после усиления, Носите перчатки, и менять их часто. После завершения реакции ПЦР, Не открывайте реакционные трубки сразу. Позвольте им достаточно остыть при 4 ° C или -20 ° C перед открытием, чтобы минимизировать риск загрязнения продукта ПЦР в лабораторной среде.
*Для OEM, Пожалуйста, свяжитесь с нашим продавцом
Отзывы
Отзывов пока нет.