2× Taq PCR Campuran Utama(dengan pewarna)
Nomor Barang: E002 Spesifikasi:1mL Penyimpanan: Simpan pada suhu -20°C
Perkenalan produk:
Campuran Master PCR Taq 2x (dengan pewarna) adalah larutan yang telah dicampur sebelumnya dengan dua kali konsentrasi DNA Polimerase, Penyangga PCR, Campuran dNTP, dan indikator. Saat menggunakan produk ini, cukup tambahkan templat dan primer ke larutan yang sudah dicampur sebelumnya, dan lengkapi volumenya dengan ddH2O untuk reaksi PCR. Hal ini menyederhanakan langkah operasional dan mengurangi risiko kontaminasi selama prosedur PCR. Selain itu, larutan yang telah dicampur sebelumnya mengandung reagen pewarna yang diperlukan untuk elektroforesis gel, memungkinkan elektroforesis gel langsung setelah PCR. Produk ini menawarkan sensitivitas tinggi, spesifisitas yang kuat, dan rentang linier yang luas, memungkinkan kuantifikasi gen target yang lebih akurat. Produk PCR yang diperkuat menggunakan produk ini mempunyai basis A tambahan pada 3′ akhir, memfasilitasi kloning menjadi vektor T.
Isi produk:
Komponen | E002 |
2× Taq PCR Master Mix(dengan pewarna) | 1ml |
Penyimpanan:
Simpan pada suhu -20°C, dengan umur simpan minimum 12 bulan.
Kontrol Kualitas:
Produk ini telah menjalani pengujian kualitas dan bebas dari aktivitas endonuklease, aktivitas eksonuklease, dan kontaminasi ribonuklease. DNA genom inang sisa ada di bawah 10 salinan.
Penggunaan Produk:
Amplifikasi DNA menggunakan metode PCR; Penentuan urutan DNA.
Petunjuk Penggunaan:
- Biarkan semua larutan reaksi PCR yang diperlukan mencapai keseimbangan pada suhu kamar hingga larut sepenuhnya. Campurkan larutan secara menyeluruh dan atur sistem reaksi PCR di atas es.
- Disarankan untuk mengatur sistem reaksi PCR di penangas es atau di dalam pendingin, mengikuti sistem reaksi yang direkomendasikan untuk referensi.
- Pipet secara menyeluruh dan campur sistem reaksi yang telah disiapkan menggunakan pipet, tutup tabung PCR dengan penutup, beri label dengan tepat, dan sentrifugasi sebentar pada suhu kamar.
- Tempatkan tabung PCR yang telah disiapkan ke dalam mesin PCR, mengatur kondisi reaksi, dan memulai reaksi PCR.
Sistem Reaksi yang Direkomendasikan:
Reagen | 25μL Volume Sistem | Konsentrasi Akhir |
2× Taq PCR Master Mix(dengan pewarna) | 12.5μL | 1× |
Primer I (10mikron) | 0.5-2.5μL | 0.2-1.0μM |
Primer II (10mikron) | 0.5-2.5μL | 0.2-1.0μM |
Templat DNA | 1μL sesuai kebutuhan | — |
ddH2HAI | Hingga 25μL | — |
Kondisi Reaksi:
Dalam keadaan normal, metode dua langkah dapat digunakan untuk reaksi. Jika amplifikasi dua langkah tidak memuaskan, metode tiga langkah dapat digunakan untuk menyiapkan program reaksi PCR. Mengingat ketidakpastian kelimpahan gen target dalam templat cDNA, disarankan untuk digunakan 35-38 siklus untuk amplifikasi awal dan mengatur jumlah siklus berdasarkan hasil amplifikasi.
Metode/Langkah | Pengaturan waktu | Siklus |
95℃ (Pra-denaturasi) | 2-5menit | 1 |
95℃ (Denaturasi) | 10detik | 28-40Siklus
(Template Plasmid atau Genomik:28-35siklus; Templat cDNA:30-40siklus) |
55℃-60℃ (anil) | 30detik | |
72℃ (Perpanjangan) | 1menit / 1-3kb | |
72℃ (Perpanjangan Terakhir) | 5-10menit | 1 |
4℃/16℃(Tahan) | ∞ | — |
Catatan: Kondisi reaksi dapat disesuaikan dan dioptimalkan sesuai dengan kebutuhan sebenarnya.
Tindakan pencegahan:
- Waktu perpanjangan dapat disesuaikan berdasarkan faktor seperti lamanya dan kandungan GC produk PCR. Lamanya waktu perpanjangan per kb produk erat kaitannya dengan kompleksitas template: dibutuhkan template sederhana 20 detik, yang dibutuhkan oleh templat biasa 30 detik, dan templat yang rumit diperlukan 1 menit.
- Pengaturan reaksi PCR harus disesuaikan dengan kondisi yang berbeda seperti templat, primer, panjang produk PCR, dan konten GC. Konsentrasi akhir primer biasanya berada dalam kisaran 0,2-1,0μM. Konsentrasi cetakan DNA dapat disesuaikan. Untuk template yang kompleks atau konten GC tinggi, disarankan untuk memperpanjang waktu pra-denaturasi/denaturasi atau perpanjangan dan meningkatkan suhu denaturasi/anil.
- Gunakan area dan pipet yang ditentukan sebelum dan sesudah amplifikasi, memakai sarung tangan, dan sering-seringlah mengubahnya. Setelah selesai reaksi PCR, jangan langsung membuka tabung reaksi. Biarkan cukup dingin pada suhu 4°C atau -20°C sebelum dibuka untuk meminimalkan risiko kontaminasi produk PCR ke lingkungan laboratorium.
*Untuk OEM, Silakan hubungi penjual kami
Ulasan
Belum ada ulasan.