Набор для извлечения геномной ДНК из мазков из полости рта

1. Компоненты набора реагентов

Технические характеристики	50Т	100Т
Кот. Нет.	SN0233	SN0234
Колонки для экстракции ДНК (набор)	50 (набор)	100 (набор)
Реагентный буфер B	20 мл	2×20 мл
Реагентный буфер C	30 мл	2×30 мл
Промывной буфер 1	15 мл	2 × 15 мл
Элюирующий буфер	20 мл	20 мл
Протеиназа К	1мл	1мл
РНКаза А	1мл	1мл
Инструкция по эксплуатации	1	1

 

2. Хранилище

Этот набор реагентов следует хранить при комнатной температуре. (15-25℃) и в сухих условиях, со сроком годности 12 месяцы. Колонки для экстракционной очистки ДНК можно хранить в течение 1 год в прохладной и сухой среде. протеиназа К и РНКаза А содержат консерванты, возможность транспортировки при комнатной температуре, но для длительного хранения, их следует хранить при -20 ℃.

3. Инструкции по использованию набора реагентов

3.1 Этот набор реагентов предназначен для исследований в области молекулярной биологии и не должен использоваться для диагностики или лечения заболеваний..

3.2 Некоторые компоненты набора реагентов содержат раздражители.. Рекомендуются защитные меры, такие как ношение защитной одежды и очков..

3.3 Во время использования этого набора реагентов, высокоскоростная центрифуга, водяная баня (металлическая ванна), вихревой смеситель, безводный этанол, стерильная деионизированная вода, и EP-трубки должны быть подготовлены пользователем..

4. Знакомство с набором реагентов

 

Пероральный тампон Очистка ДНК Комплект обеспечивает быстрый и эффективный метод очистки ДНК из пероральных мазков, широко используется для экстракции эпителиальных клеток, таких как пероральный эпителий.

 

Набор для быстрого очистки перорального мазы 30 минуты. Весь процесс очистки не требует использования токсичных реагентов типа фенол-хлороформа.. Выделенная ДНК может быть непосредственно использована для ПЦР, Саузерн-блоттинг, и другие приложения.

5. Экспериментальные принципы и процедуры

6. Процесс экстракции

Прежде чем начать эксперимент:

А. Реагентный буфер B и C может выпадать в осадок в условиях низких температур. Мы рекомендуем нагревать при температуре 65℃для 5 минуты. После растворения осадка, его можно использовать нормально.

Б. Перед использованием, добавьте указанное количество безводного этанола в Промывной буфер 1как указано на этикетке бутылки. Отметьте галочкой на этикетке, что указано добавление безводного этанола..

С. Элюирующий буфер представляет собой0.1х ТЕ решениесодержащий минимальное количество ЭДТА. Если ЭДТА может повлиять на последующие эксперименты, рекомендуется заменить элюционный буфер стерильной деионизированной водой..

1. Обработка образцов:
2. Выборка: Возьмите стерилизованный ватный тампон, вставить его в рот, потерте по внутренней щеке взад и вперед, чтобы 20 раз.
3. Используйте ножницы, чтобы разрезать голову хлопкового тампона, поместить это в 2 центрифужная пробирка мл, и добавить 400мкл Реагент Буфер б.
4. Добавлять10мкл протеиназы К (10 мг/мл) и 10 мкл РНКаза А (10 мг/мл), инвертировать тщательно, инкубировать при 65 ° С для 20 минуты, вихрь для 10 Секунды во время инкубации.
5. Добавлять 400мкл Реагент Буфер cк лизату, вихрь тщательно.
6. Добавлять 200мкл предварительного абсолютного этанола, хорошо перемешать; может произойти осадки, но это не повлияет на последующие эксперименты.
7. Перенести полученную жидкость в колонку экстракции и очистки ДНК (набор) (примерно 650~700 мкл каждый раз), центрифуга в >8,000 об/мин для 1 минута, выбросить собранную отработанную жидкость, и повторно вводите в колонку для извлечения и очистки ДНК в колонке ДНК (набор) для следующего шага.
8. Поместите колонку извлечения и очистки ДНК (набор) в коллекционную трубку, добавлять 300мкл промывочного буфера 1, центрифуга в >8,000 об/мин для 1 минута, выбросить отработанную жидкость, и повторно встроить колонку экстракции и очистки ДНК (набор) в трубку для следующего шага.

(Примечание: Убедитесь, что абсолютный этанол был добавлен в промывочный буфер 1.)

7. Добавлять 500мкл промывочного буфера 1к колонке извлечения и очистки ДНК (набор), центрифуга в 14,000 об/мин (20,000×г) для 2 минуты, Продолжите центрифугирование соответствующим образом, чтобы дальше высушить мембрану.
8. Поместите колонку извлечения и очистки ДНК (набор) в новую центрифужную пробирку, открыть крышку, инкубировать при 65 ° С для 2 минуты; Этот шаг может быть продлен соответствующим образом, чтобы максимально испарить этанол, предотвращение остаточного этанола затронуть вниз по течению экспериментов.
9. Элюйт 100мкл элюирующего буферана мембрану, центрифуга в 12,000 об/мин для 2 минуты.

(Примечание: 1. Элюирующая ДНК с 50 мкл буфера элюции может увеличить концентрацию ДНК, но снизить общий выход ДНК; 2. Элюированная ДНК в элюате может быть повторно поставлена ​​в колонку экстракции и очистки ДНК, снова центрифугировать в 12,000 об/мин для 2 минуты для увеличения урожайности ДНК.)