Orale Tupfergenom -DNA -Extraktionskit

1. Bestandteile des Reagenzienkits

2. Lagerung

Dieses Reagenzienkit sollte bei Raumtemperatur gelagert werden (15-25℃) und bei trockenen Bedingungen, mit einer Haltbarkeit von 12 Monate. Die DNA-Extraktions-Reinigungssäulen können aufbewahrt werden 1 Jahr in einer kühlen und trockenen Umgebung. Proteinase K und RNase A enthalten Konservierungsstoffe, ermöglicht den Transport bei Raumtemperatur, aber zur Langzeitlagerung, Sie sollten bei -20℃ aufbewahrt werden.

3. Anweisungen zur Verwendung des Reagenzienkits

3.1 Dieses Reagenzienkit ist für die molekularbiologische Forschung bestimmt und sollte nicht zur Diagnose oder Behandlung von Krankheiten verwendet werden.

3.2 Einige Komponenten im Reagenzienkit enthalten Reizstoffe. Schutzmaßnahmen wie das Tragen von Schutzkleidung und Schutzbrille werden empfohlen.

3.3 Während der Verwendung dieses Reagenzienkits, eine Hochgeschwindigkeitszentrifuge, Wasserbad (Metallbad), Vortexmixer, Wasserfreies Ethanol, steriles entionisiertes Wasser, und EP-Röhren müssen vom Benutzer vorbereitet werden.

4. Einführung in das Reagenzienkit

Der orale Tupfer DNA-Reinigung Kit bietet eine schnelle und effiziente Methode zum Reinigen von DNA aus oralen Tupfer, weit verbreitet für die Extraktion von Epithelzellen wie oralem Epithel.

Das orale Tupfer -DNA -Schnellreinigungskit kann die gesamte DNA aus oralen Epithelzellen innerhalb von Inneren extrahieren 30 Protokoll. Der gesamte Reinigungsprozess erfordert keine giftigen Reagenzien wie Phenolchloroform. Die extrahierte DNA kann direkt verwendet werden PCR, Southern Blot, und andere Anwendungen.

5. Experimentelle Prinzipien und Verfahren

6. Extraktionsprozess

Vor Beginn des Experiments:

A. Reagenzpuffer B und C. kann bei niedrigen Temperaturen ausfallen. Wir empfehlen das Erhitzen bei 65 ℃ für 5 Protokoll. Nachdem sich der Niederschlag aufgelöst hat, es kann normal verwendet werden.

B. Vor Gebrauch, Fügen Sie die angegebene Menge an wasserfreiem Ethanol hinzu Waschpuffer 1Wie auf dem Flaschenetikett angegeben. Markieren Sie auf dem Etikett ein Häkchen, um die Zugabe von wasserfreiem Ethanol anzuzeigen.

C. Elutionspuffer ist ein0.1x TE-Lösungmit minimalen Mengen an EDTA enthält. Wenn EDTA nachfolgende Experimente beeinflussen könnte, Es ist ratsam, den Elutionspuffer durch steriles entionisiertes Wasser zu ersetzen.

1. Probenhandhabung:
2. Probenahme: Nehmen Sie einen sterilisierten Baumwollabstrich, Setzen Sie es in den Mund ein, reiben Sie für mehr als die innere Wange hin und her 20 mal.
3. Verwenden Sie eine Schere, um den Kopf des Baumwollabstrichs zu schneiden, Legen Sie es in a 2 ML Zentrifugenröhre, und fügen Sie hinzu 400μl von Reagens Puffer b.
4. Hinzufügen10μl Proteinase K (10 mg/ml) und 10 μl RNase a (10 mg/ml), gründlich umkehren, bei 65 ° C inkubieren für 20 Protokoll, Vortex für 10 Sekunden während der Inkubation.
5. Hinzufügen 400μl von Reagens Puffer czum Lysat, Vortex gründlich.
6. Hinzufügen 200μl von vorgekühltem absolutem Ethanol, gut mischen; Niederschlag kann auftreten, Dies hat jedoch keinen Einfluss auf nachfolgende Experimente.
7. Übertragen Sie die erhaltene Flüssigkeit in eine DNA -Extraktions- und Reinigungssäule (Bausatz) (jedes Mal ungefähr 650 ~ 700 μl), Zentrifuge bei >8,000 U/min für 1 Minute, Entsorgen Sie die gesammelte Abfallflüssigkeit, und stationieren Sie das Sammelrohr in die DNA -Extraktions- und Reinigungssäule ein (Bausatz) für den nächsten Schritt.
8. Platzieren Sie die DNA -Extraktions- und Reinigungssäule (Bausatz) in ein Sammelrohr, hinzufügen 300μl Waschpuffer 1, Zentrifuge bei >8,000 U/min für 1 Minute, Entsorgen Sie die Abfallflüssigkeit, und die DNA -Extraktions- und Reinigungssäule wieder eineressen (Bausatz) in die Röhre für den nächsten Schritt.

(Notiz: Stellen Sie sicher, dass das absolute Ethanol hinzugefügt wurde, um den Puffer zu waschen 1.)

7. Hinzufügen 500μl Waschpuffer 1zur DNA -Extraktions- und Reinigungssäule (Bausatz), Zentrifuge bei 14,000 U/min (20,000×g) für 2 Protokoll, Erweitern Sie die Zentrifugationszeit angemessen, um die Membran weiter zu trocknen.
8. Platzieren Sie die DNA -Extraktions- und Reinigungssäule (Bausatz) in ein neues Zentrifugenröhrchen füllen, Öffne den Deckel, bei 65 ° C inkubieren für 2 Protokoll; Dieser Schritt kann angemessen erweitert werden, um Ethanol so weit wie möglich zu verdampfen, Das Verhinderung des Verhinderns des Restethanols, nachgeschaltete Experimente zu beeinflussen.
9. Elute 100μl Elutionspufferauf die Membran, Zentrifuge bei 12,000 U/min für 2 Protokoll.

(Notiz: 1. Die Eluting -DNA mit 50 μl Elutionspuffer kann die DNA -Konzentration erhöhen, aber die Gesamt -DNA -Ausbeute verringern; 2. ELUTE DNA im Eluat kann auf die DNA -Extraktions- und Reinigungssäule angewendet werden, Zentrifuge erneut bei 12,000 U/min für 2 Minuten, um die DNA -Ausbeute zu erhöhen.)