口服拭子基因組DNA提取試劑盒

1. 試劑盒的組成

規格	50時間	100時間
貓. 不.	SN0233	SN0234
DNA萃取柱 (放)	50 (放)	100 (放)
試劑緩衝液B	20 毫升	2×20 毫升
試劑緩衝液C	30 毫升	2×30 毫升
洗滌緩衝液 1	15 毫升	2 × 15 毫升
洗脫緩衝液	20 毫升	20 毫升
蛋白酶K	1毫升	1毫升
核糖核酸酶A	1毫升	1毫升
使用說明書	1	1

 

2. 貯存

該試劑盒應在室溫下保存 (15-25℃) 並且在乾燥條件下, 保存期限為 12 月. DNA 萃取純化柱可保存 1 在涼爽乾燥的環境中度過一年. 蛋白酶 K 和 核糖核酸酶A 含防腐劑, 允許在室溫下運輸, 但為了長期儲存, 應保存在-20℃.

3. 試劑盒使用說明

3.1 本試劑盒適用於分子生物學研究，不得用於疾病診斷或治療.

3.2 試劑盒中部分成分含有刺激物. 建議採取防護措施，例如穿著防護衣和護目鏡.

3.3 本試劑盒使用過程中, 高速離心機, 水浴 (金屬浴), 渦旋混合器, 無水乙醇, 無菌去離子水, 和EP管需用戶自備.

4. 試劑盒簡介

 

口腔拭子 DNA純化 套件提供了一種快速有效的方法來純化口服拭子的DNA, 廣泛用於提取上皮細胞，例如口服上皮.

 

口服拭子DNA快速純化套件可以從口腔上皮細胞中提取總DNA 30 分分鐘. 整個純化過程不需要苯酚氯仿等有毒試劑. 萃取的DNA可直接用於 聚合酶鍊式反應, 南方印跡, 和其他應用.

5. 實驗原理和程序

6. 提取過程

開始實驗前:

A. 試劑緩衝液B和C 低溫條件下可能會沉澱. 我們建議在 65℃ 加熱 5 分分鐘. 沉澱溶解後, 可以正常使用.

乙. 使用前, 加入規定量的無水乙醇 洗滌緩衝液 1如瓶子標籤上所示. 在標籤上打勾，表示添加了無水乙醇.

C. 洗脫緩衝液是0.1x TE 解決方案含有極少量的 EDTA. EDTA是否可能影響後續實驗, 建議用無菌去離子水取代洗脫緩衝液.

1. 樣品處理:
2. 採樣: 服用滅菌棉籤, 將其插入嘴, 靠在內在的臉頰來回摩擦超過 20 次.
3. 使用剪刀剪掉棉籤的頭部, 將其放入 2 毫升離心管, 並添加 400微升的 試劑 緩衝區b.
4. 添加10μL蛋白酶K (10 毫克/毫升) 和10μLRNaseA (10 毫克/毫升), 徹底倒轉, 在65°C下孵育 20 分分鐘, 渦流 10 孵育過程中的秒.
5. 添加 400微升的 試劑 緩衝區c至裂解物, 渦旋徹底.
6. 添加 200μL的預開心的絕對乙醇, 攪拌均勻; 可能會發生降水, 但不影響後續實驗.
7. 將獲得的液體轉移到DNA提取和純化柱中 (成套工具) (每次約650~700μl), 離心機在 >8,000 轉速為 1 分分鐘, 丟棄收集的廢液, 並將收集管重新插入DNA提取和純化柱中 (成套工具) 下一步.
8. 放置DNA提取和純化柱 (成套工具) 進入收集管, 添加 300µl 洗滌緩衝液 1, 離心機在 >8,000 轉速為 1 分分鐘, 丟棄廢液, 並重新插入DNA提取和純化柱 (成套工具) 進入管中進行下一步.

(筆記: 確保添加了絕對乙醇以洗滌緩衝液 1.)

7. 添加 500µl 洗滌緩衝液 1到DNA提取和純化柱 (成套工具), 離心機在 14,000 轉速 (20,000×g) 為了 2 分分鐘, 適當地擴展離心時間以進​​一步乾燥膜.
8. 放置DNA提取和純化柱 (成套工具) 放入新的離心管中, 打開蓋子, 在65°C下孵育 2 分分鐘; 可以適當擴展此步驟以盡可能蒸發乙醇, 防止殘留的乙醇影響下游實驗.
9. 洗脫 100µl 洗脫緩衝液到膜上, 離心機在 12,000 轉速為 2 分分鐘.

(筆記: 1. 用50μl洗脫緩衝液洗脫DNA可以增加DNA濃度，但會降低總DNA產量; 2. 可以將洗脫的DNA重新塗在DNA提取和純化柱上, 再次離心 12,000 轉速為 2 分鐘以增加DNA產量。)