Мини-набор для извлечения геномной ДНК животных/клеток

1. Компоненты набора реагентов

Технические характеристики	50Т	100Т
Кот. Нет.	SN0221	SN0222
Колонки для экстракции ДНК (набор)	50 (набор)	100 (набор)
Реагент буфер IV	20 мл	2×20 мл
Реагент буферный каплер	30 мл	30 мл
Промывной буфер 1	15 мл	2 × 15 мл
Элюирующий буфер	20 мл	20 мл
Протеиназа К	1мл	2х1мл
РНКазаА	1мл	1мл
Инструкция по эксплуатации	1	1

2. Хранилище

Этот набор реагентов следует хранить при комнатной температуре. (15-25℃) и в сухих условиях, со сроком годности 12 месяцы. Колонки для экстракционной очистки ДНК можно хранить в течение 1 год в прохладной и сухой среде. протеиназа К и РНКаза А содержат консерванты, возможность транспортировки при комнатной температуре, но для длительного хранения, их следует хранить при -20 ℃.

3. Инструкции по использованию набора реагентов

3.1 Этот набор реагентов предназначен для исследований в области молекулярной биологии и не должен использоваться для диагностики или лечения заболеваний..

3.2 Некоторые компоненты набора реагентов содержат раздражители.. Рекомендуются защитные меры, такие как ношение защитной одежды и очков..

3.3 Во время использования этого набора реагентов, высокоскоростная центрифуга, водяная баня (металлическая ванна), вихревой смеситель, безводный этанол, стерильная деионизированная вода, и EP-трубки должны быть подготовлены пользователем..

4. Знакомство с набором реагентов

Животное/ткань Очистка ДНК Комплект предлагает быстрое и эффективное решение для очистки ДНК ткани животных и клеточной культуры, широко применимо для тканей животных и клеточных культур.

Этот комплект быстрого очистки ДНК быстро извлекает общую ДНК от животных и клеток, давая ДНК, непосредственно полезное для ПЦР, Саузерн-блоттинг, и подобные приложения. Процесс очистки не требует токсичных агентов, таких как фенол-хлороформ, Сделать этот набор для очистки ДНК очень подходящим для различных других образцов.

5. Экспериментальные принципы и процедуры

6. Процесс экстракции

Прежде чем начать эксперимент:

А. Реагент буфер IV имеет тенденцию осаждать в низкотемпературных условиях. Рекомендуется нагревать при температуре 65℃ для 5 минуты. После осаждения растворяется, его можно использовать нормально.

Б. Перед использованием, добавьте указанное количество безводного этанола в СтиратьБуфер 1 как указано на этикетке флакона с реагентом., и отметьте проверку на этикетке, чтобы указать добавление безводного этанола.

С. Элюирующий буфер представляет собой 0.1х ТЕ решение с минимальным содержанием ЭДТА. Если ЭДТА может повлиять на последующие эксперименты, рекомендуется заменить элюционный буфер стерильной деионизированной водой..

1. Обработка образцов:

А. Возьмите клеточную культуру, центрифуга в 12,000 об/мин для 1 Минута, чтобы собрать ячейки, и максимально аспирировать супернатант. Добавить 250 мкл реагентного буфера IV и 10 мкл RNASEA (10 мг/мл) к собранным клеткам, тщательно приостановка, и инкубировать при 65 ° С для 10 минуты.

Б. Измельчить ткань не превышают 25 Mg в тонкий порошок с использованием жидкого азота. Добавить 200 мкл буфера реагента IV, 20мкл протеиназы К (10 мг/мл), и 10 мкл rnasea (10 мг/мл) к порошке, хорошо встряхнуть, и инкубировать при 65 ° С для 30 минуты, встряхивая смесь четыре раза в этот период.

2. Добавлять 200мкл реагентного буфера Cplus к лизату и хорошо перемешайте. Если появился белый осадок, это может быть оставлено нетронутым; это не повлияет на последующие эксперименты после исчезновения осадка.

3. Добавлять 200мкл безводного этанола и тщательно перемешать. Может произойти некоторые осадки, но это не повлияет на последующие эксперименты.

4. Примените полученную жидкость к колонке очистки экстракции ДНК (рукав) (примерно 650~700 мкл каждый раз), пусть сидеть при комнатной температуре для 2 минуты, центрифуга в 12,000 об/мин для 30 секунды, выбросить собранные отходы, и повторно вставьте пробирку для сбора в колонку очистки для следующего шага..

5. Поместите колонку для очистки экстракции ДНК (рукав) в новую коллекционную рукав, добавлять 700мкл СтиратьБуфер 1, центрифуга в 12,000 об/мин для 30 секунды, выбросить отходы, и поместите колонку для экстракционной очистки ДНК (рукав) Вернуться в рукав для следующего шага.

(Примечание: Подтвердите добавление безводного этанола в ополаснительный буфер 1.)

6. Добавлять 500мкл СтиратьБуфер 1 в колонку очистки экстракции ДНК (рукав), центрифуга в 12,000 об/мин для 30 секунды, Продолжите время центрифугирования надлежащим образом, чтобы убедиться, что мембрана более сухая.

(Примечание: Этанол оказывает значительное влияние на последующие эксперименты; поэтому, мембранная сухость имеет решающее значение. После центрифугирования, убедиться, что этанол остается до элюирования. Отбросьте трубки отходов и сбора. После полоскания промывочным буфером 1, Мембрана на колонке очистки ДНК должна иметь слабый цвет. Тщательно удалить колонку очистки ДНК после центрифугирования, Обеспечение того, чтобы он не касался сборочной трубки, чтобы предотвратить загрязнение этанолом.)

7. Поместите колонку для очистки ДНК в новую центрифужную трубку, Добавить 100 мкл буфера элюции непосредственно на мембрану, центрифуга в 12,000 об/мин для 1 минута, и собрать ДНК.

(Примечание: Элюирующая ДНК с 50 мкл буфера элюции может увеличить концентрацию ДНК, но снижает общий выход ДНК.)