1. ส่วนประกอบของชุดรีเอเจนต์
| ข้อมูลจำเพาะ | 50ต | 100ต |
| แมว. เลขที่. | SN0221 | SN0222 |
| คอลัมน์สกัดดีเอ็นเอ (ชุด) | 50 (ชุด) | 100 (ชุด) |
| Reagent Buffer IV | 20 มล | 2×20 มล |
| Reagent Buffer Cplus | 30 มล | 30 มล |
| ล้างบัฟเฟอร์ 1 | 15 มล | 2 × 15 มล |
| บัฟเฟอร์การชะล้าง | 20 มล | 20 มล |
| โปรตีนเค | 1มล | 2x1มล |
| อาร์เนสเอ | 1มล | 1มล |
| คู่มือการใช้งาน | 1 | 1 |
2. พื้นที่จัดเก็บ
ชุดรีเอเจนต์นี้ควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง (15-25℃) และในสภาวะแห้ง, มีอายุการเก็บรักษาที่ 12 เดือน. คอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์จากการสกัด DNA สามารถเก็บไว้ได้ 1 ปีในสภาพแวดล้อมที่เย็นและแห้ง. โปรตีน K และ อาร์เนส เอ มีสารกันบูด, จึงสามารถขนส่งได้ที่อุณหภูมิห้อง, แต่สำหรับการจัดเก็บระยะยาว, ควรเก็บไว้ที่ -20 ℃.
3. คำแนะนำในการใช้ชุดรีเอเจนต์
3.1 ชุดรีเอเจนต์นี้มีไว้สำหรับการวิจัยอณูชีววิทยา และไม่ควรใช้สำหรับการวินิจฉัยหรือการรักษาโรค.
3.2 ส่วนประกอบบางอย่างในชุดรีเอเจนต์มีสารระคายเคือง. แนะนำให้ใช้มาตรการป้องกัน เช่น การสวมชุดป้องกันและแว่นตา.
3.3 ระหว่างการใช้งานชุดรีเอเจนต์นี้, เครื่องหมุนเหวี่ยงความเร็วสูง, อ่างอาบน้ำ (อาบน้ำโลหะ), เครื่องผสมน้ำวน, เอทานอลปราศจากน้ำ, น้ำปราศจากไอออนฆ่าเชื้อ, และผู้ใช้ต้องเตรียมท่อ EP.
4. ข้อมูลเบื้องต้นเกี่ยวกับชุดรีเอเจนต์
The Animal/Tissue การทำให้บริสุทธิ์ของดีเอ็นเอ Kit offers a rapid and effective solution for animal tissue and cell culture DNA purification, widely applicable across animal tissues and cell cultures.
This DNA rapid purification kit swiftly extracts total DNA from animals and cells, yielding DNA directly usable for พีซีอาร์, การซับใต้, and similar applications. The purification process does not require toxic agents like phenol-chloroform, making this DNA purification kit highly suitable for various other samples.
5. หลักและวิธีการทดลอง
6. กระบวนการสกัด
ก่อนเริ่มการทดลอง:
ก. Reagent Buffer IV tends to precipitate under low-temperature conditions. แนะนำให้ตั้งอุณหภูมิ 65°C เป็นเวลา 5 นาที. After the precipitation dissolves, สามารถใช้งานได้ตามปกติ.
บี. ก่อนใช้งาน, เพิ่มจำนวนเอทานอลที่ปราศจากน้ำ ล้างกันชน 1 ตามที่ระบุไว้ในฉลากขวดรีเอเจนต์, and mark a check on the label to indicate the addition of anhydrous ethanol.
ค. บัฟเฟอร์การชะล้างคือ 0.1x โซลูชัน TE with minimal EDTA content. หาก EDTA อาจส่งผลต่อการทดลองครั้งต่อไป, ขอแนะนำให้เปลี่ยน Elution Buffer ด้วยน้ำปราศจากไอออนที่ปราศจากไอออน.
- การจัดการตัวอย่าง:
ก. Take cell culture, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 minute to collect cells, and aspirate the supernatant as much as possible. Add 250μl of Reagent Buffer IV and 10μl of RNaseA (10 มก./มล) to the collected cells, thoroughly suspend, and incubate at 65°C for 10 นาที.
บี. Grind tissue not exceeding 25 mg into a fine powder using liquid nitrogen. Add 200μl of Reagent Buffer IV, 20μlของ proteinase k (10 มก./มล), and 10μl of RNaseA (10 มก./มล) to the powder, shake well, and incubate at 65°C for 30 นาที, shaking the mixture four times during this period.
2. เพิ่ม 200μl of Reagent Buffer Cplus to the lysate and mix well. หากมีการตกตะกอนสีขาวปรากฏขึ้น, it can be left undisturbed; มันจะไม่ส่งผลกระทบต่อการทดลองที่ตามมาเมื่อการตกตะกอนหายไป.
3. เพิ่ม 200เอทานอลปราศจากน้ำ ไมโครลิตร and mix thoroughly. Some precipitation might occur, แต่มันจะไม่ส่งผลกระทบต่อการทดลองครั้งต่อไป.
4. ใช้ของเหลวที่ได้รับกับคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์สำหรับการสกัด DNA (ปลอกหุ้ม) (ประมาณ 650~700μl ในแต่ละครั้ง), let it sit at room temperature for 2 นาที, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 30 วินาที, ทิ้งขยะที่รวบรวมไว้, and re-insert the collection tube into the purification column for the next step.
5. วางคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์สำหรับการสกัด DNA (ปลอกหุ้ม) into a new collection sleeve, เพิ่ม 700ไมโครลิตรของ ล้างกันชน 1, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 30 วินาที, ทิ้งขยะ, and place the DNA extraction purification column (ปลอกหุ้ม) back into the sleeve for the next step.
(บันทึก: Confirm the addition of anhydrous ethanol to Rinse Buffer 1.)
6. เพิ่ม 500ไมโครลิตรของ ล้างกันชน 1 ไปยังคอลัมน์การสกัดดีเอ็นเอ (ปลอกหุ้ม), เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 30 วินาที, extend centrifugation time appropriately to ensure the membrane is drier.
(บันทึก: Ethanol has a significant impact on subsequent experiments; ดังนั้น, membrane dryness is crucial. หลังจากการปั่นแยก, ตรวจสอบให้แน่ใจว่าไม่มีเอทานอลเหลืออยู่ก่อนการชะล้าง. Discard the waste and collection tubes afterward. After rinsing with Wash Buffer 1, the membrane on the DNA purification column should have a faint color. Carefully remove the DNA purification column after centrifugation, ensuring it doesn’t touch the collection tube to prevent ethanol contamination.)
7. Place the DNA purification column in a new centrifuge tube, add 100μl of Elution Buffer directly onto the membrane, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาที, และรวบรวม DNA.
(บันทึก: Eluting DNA with 50μl of Elution Buffer can increase DNA concentration but decreases total DNA yield.)
รีวิว
ยังไม่มีบทวิจารณ์