1. Composants du kit de réactifs
| Caractéristiques | 50T | 100T |
| Chat. Non. | SN0221 | SN0222 |
| Colonnes d'extraction d'ADN (ensemble) | 50 (ensemble) | 100 (ensemble) |
| Tampon réactif IV | 20 ml | 2×20 ml |
| Reagent Buffer Cplus | 30 ml | 30 ml |
| Tampon de lavage 1 | 15 ml | 2 × 15 ml |
| Tampon d'élution | 20 ml | 20 ml |
| Protéinase K | 1ml | 2x1ml |
| RNASEA | 1ml | 1ml |
| Manuel d'instructions | 1 | 1 |
2. Stockage
Ce kit de réactifs doit être conservé à température ambiante (15-25℃) et dans des conditions sèches, avec une durée de conservation de 12 mois. Les colonnes de purification par extraction d'ADN peuvent être stockées pendant 1 année dans un environnement frais et sec. Protéinase K et RNase A contiennent des conservateurs, permettant le transport à température ambiante, mais pour un stockage à long terme, ils doivent être conservés à -20℃.
3. Instructions d'utilisation du kit de réactifs
3.1 Ce kit de réactifs est destiné à la recherche en biologie moléculaire et ne doit pas être utilisé pour le diagnostic ou le traitement de maladies..
3.2 Certains composants du kit de réactifs contiennent des irritants. Des mesures de protection telles que le port de vêtements et de lunettes de protection sont recommandées.
3.3 Pendant l'utilisation de ce kit de réactifs, une centrifugeuse à grande vitesse, bain d'eau (bain en métal), mélangeur de vortex, éthanol anhydre, eau déminéralisée stérile, et les tubes EP doivent être préparés par l'utilisateur.
4. Introduction au kit de réactifs
The Animal/Tissue Purification de l'ADN Kit offers a rapid and effective solution for animal tissue and cell culture DNA purification, widely applicable across animal tissues and cell cultures.
This DNA rapid purification kit swiftly extracts total DNA from animals and cells, yielding DNA directly usable for RAP, Southern Blot, and similar applications. The purification process does not require toxic agents like phenol-chloroform, making this DNA purification kit highly suitable for various other samples.
5. Principes et procédures expérimentaux
6. Processus d'extraction
Avant de commencer l'expérience:
UN. Tampon réactif IV tends to precipitate under low-temperature conditions. It is recommended to heat at 65℃ for 5 minutes. After the precipitation dissolves, il peut être utilisé normalement.
B. Avant usage, ajouter la quantité spécifiée d'éthanol anhydre à LaverTampon 1 comme indiqué sur l'étiquette du flacon de réactif, and mark a check on the label to indicate the addition of anhydrous ethanol.
C. Le tampon d'élution est un 0.1x solution TE avec un contenu EDTA minimal. Si l'EDTA peut affecter les expériences ultérieures, il est recommandé de remplacer le tampon d'élution par de l'eau déionisée stérile.
- Manipulation des échantillons:
UN. Take cell culture, centrifuger à 12,000 tr/min pour 1 minute pour collecter les cellules, and aspirate the supernatant as much as possible. Add 250μl of Reagent Buffer IV and 10μl of RNaseA (10 mg/ml) to the collected cells, thoroughly suspend, and incubate at 65°C for 10 minutes.
B. Grind tissue not exceeding 25 mg into a fine powder using liquid nitrogen. Add 200μl of Reagent Buffer IV, 20μl de protéinase k (10 mg/ml), and 10μl of RNaseA (10 mg/ml) to the powder, shake well, and incubate at 65°C for 30 minutes, shaking the mixture four times during this period.
2. Ajouter 200μl of Reagent Buffer Cplus au lysat et bien mélanger. Si un précipité blanc apparaît, il peut être laissé sans être perturbé; Cela n'affectera pas les expériences ultérieures une fois que le précipité disparaîtra.
3. Ajouter 200µl d'éthanol anhydre et mélanger soigneusement. Some precipitation might occur, Mais cela n'affectera pas les expériences ultérieures.
4. Apply the obtained liquid to the DNA extraction purification column (sleeve) (environ 650 ~ 700 μl à chaque fois), let it sit at room temperature for 2 minutes, centrifuger à 12,000 tr/min pour 30 secondes, jeter les déchets collectés, et réinsérez le tube de collecte dans la colonne de purification pour l'étape suivante.
5. Placer la colonne de purification d'extraction d'ADN (sleeve) into a new collection sleeve, ajouter 700µl de LaverTampon 1, centrifuger à 12,000 tr/min pour 30 secondes, jeter les déchets, and place the DNA extraction purification column (sleeve) back into the sleeve for the next step.
(Note: Confirm the addition of anhydrous ethanol to Rinse Buffer 1.)
6. Ajouter 500µl de LaverTampon 1 à la colonne de purification d'extraction d'ADN (sleeve), centrifuger à 12,000 tr/min pour 30 secondes, extend centrifugation time appropriately to ensure the membrane is drier.
(Note: Ethanol has a significant impact on subsequent experiments; therefore, membrane dryness is crucial. Après centrifugation, s'assurer qu'il ne reste pas d'éthanol avant l'élution. Discard the waste and collection tubes afterward. After rinsing with Wash Buffer 1, the membrane on the DNA purification column should have a faint color. Carefully remove the DNA purification column after centrifugation, ensuring it doesn’t touch the collection tube to prevent ethanol contamination.)
7. Place the DNA purification column in a new centrifuge tube, add 100μl of Elution Buffer directly onto the membrane, centrifuger à 12,000 tr/min pour 1 minute, and collect the DNA.
(Note: Eluting DNA with 50μl of Elution Buffer can increase DNA concentration but decreases total DNA yield.)
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