Solarbio 글루타티온 퍼옥시다제 (GSH-Px/GPX) 활동 분석 키트

메모: 테스트 전에 예측을 위해 2~3개의 서로 다른 샘플을 채취합니다..

운영장비: 분광 광도계

고양이 번호: BC1190년

크기: 50T/24S

구성요소:

시약	양	저장	준비
용액 추출	30 밀리리터 × 1	4℃	–
시약 I	분말× 2	4℃	추가하다 3.3 사용시 용해할 희석액의 mL.
시약 II	10 μL × 1	4℃	희석하다 2 μL 시약 II 및 10 사용 전 증류수 mL.
시약 III	60 밀리리터 × 1	4℃	50°C 수조에서 결정화된 바닥을 용해시킵니다.. 바닥이 결정화 상태로 남아 있으면 상층액을 사용하십시오..
시약 IV	30 밀리리터 × 1	4℃	–
시약 V	10 밀리리터 × 1	4℃	–
기준	분말× 1	4℃	추가하다 0.405 mL의 증류수를 10 환원된 글루타티온 mg (GSH) 사용될 때.
희석제	20 밀리리터 × 1	4℃	–

제품 설명:

• 글루타티온 퍼옥시다제 (GPX), GSH-Px 또는 GPX라고도 함, 신체에서 널리 발견되는 중요한 퍼옥시다제 효소입니다..
• GPX는 환원된 글루타티온의 전환을 촉매하는 데 중요한 역할을 합니다. (GSH) 산화된 글루타티온으로 (GSSG) 독성 과산화수소를 무독성 수산기 화합물로 감소시키는 데.
• GPX의 효소 작용은 과산화수소에 의한 GSH의 산화를 포함합니다, 그 결과 GSSG가 생산되었습니다..
• GSH는 DTNB와 반응하여 다음과 같은 특징적인 흡수 피크를 갖는 화합물을 형성합니다. 412 nm.
• 흡광도 감소 412 nm은 GPX 활동의 지표 역할을 합니다..

필요하지만 제공되지 않는 시약 및 장비:

분광 광도계, 균형, 테이블 원심분리기, 1 mL 유리 큐벳, 모르타르/균질화기, EP 튜브.

절차

나. 샘플 준비:

조직:

일치율 조직 중량 (g): 용액 추출 (밀리리터)=1:5~10 (추출액 1mL에 조직 0.05g 권장), 얼음 욕조에서 균질화. 원심분리기 5000 4℃에서 rpm 10 분, 상층액을 취하다, 테스트를 위해 얼음 위에 올려 놓으세요. (상층액이 맑지 않은 경우, 원심분리기 3 분).

박테리아 또는 세포

세포의 양 (104): 용액 추출 (밀리리터): 500~1000:1 (에 추출용액 1mL를 첨가한다. 5 백만개의 세포), 세포를 파괴하기 위해 얼음 욕조를 갖춘 초음파(300여,3에스, 간격 7초,총 시간 3 분). 원심분리 5000 4℃에서 rpm 10 분, 상등액을 채취하여 얼음 위에 올려 놓고 시험한다. (상층액이 맑지 않은 경우, 원심분리기 3 분).

혈청 샘플: 직접 감지

II. 결정 절차:

1. 분광 광도계를 예열하십시오. 30 분, 파장을 조정하여 412 nm, 증류수로 0을 설정하고.
2. 표준 솔루션 20 μmol/mL를 희석하여 0.25 추출 용액을 사용한 μmol/mL. 표준 솔루션 100 μL이 혼합되어 있습니다. 400 시약 IV의 μL, 그리고 표준용액의 농도는 0.05 μmol/mL. 표준용액은 혼합용액을 사용하여 조제한다..
3. 믹스 150 μL의 샘플 150 μLof 시약 I을 넣고 실온에 보관합니다. 5 분.
4. 작업 테이블: (1.5 mL 원심분리관에 다음 시약을 차례로 넣습니다.).

시약 이름(μL)	시험관 (티)	컨트롤 튜브 (씨)
샘플 상청액	100	–
시약 I	100	100
예열 5 37℃에서 분
시약 II	50	50
에 대한 반응 5 37℃에서 분
시약 III	1000	1000
샘플 혼합물	–	100

원심분리기 4000 실온에서 rpm 5 몇 분 후 상등액을 EP 튜브에 넣습니다..

시약 이름(μL)	시험관 (티)	컨트롤 튜브 (씨)	표준 튜브 (에스)	블랙 튜브 (비)
희석제	–	–	–	500
상청액	500	500	–	–
표준 혼합물	–	–	500	–
시약 IV	500	500	500	500
시약 V	125	125	125	125

잘 섞어. 그런 다음 실온에 두어 15 분, 흡광도 412 nm는 측정됩니다. 흡광도는 AT로 기록됩니다., 교류, 처럼, 그리고 AB, 각기. ΔAT = AC 계산 – 에, ΔAS= 그대로 – AB.

III. 계산:

억제율 계산 억제율 =(고양이)/(택시)×100%

가능한 멀리, 샘플의 억제율은 다음 범위 내에 있습니다. 30-70%, 그리고 가까울수록 50%, 정확할수록. 억제율이 이하인 경우 30% 또는 그 이상 70%, 일반적으로 복용량을 조정하고 다시 결정해야 합니다.. 억제율이 높을 경우, 샘플을 적절하게 희석해야 합니다.. 억제율이 낮은 경우, 농도가 높은 샘플을 다시 준비해야 합니다..

GPX 활동 계산

• 단백질 농도:

단위 정의: 효소 활성 1단위는 반응 시스템에서 분당 1nmol의 GSH 산화를 촉매하는 효소의 양으로 정의됩니다., 단백질 1mg당.

GPX (U/mg 프로트) =ΔAT ¼(ΔAS nn CS)×1000×VEV²(CPR×VSV)¤T=200×ΔAT¨ΔAS¨Cpr

• 샘플 중량

단위 정의: 효소 활성의 1단위는 산화를 촉매하는 효소의 양으로 정의됩니다. 1 반응 시스템에서 분당 GSH의 nmol, 샘플 1g당.

GPX (U/g 중량) =ΔAT ¼(ΔAS nn CS)×1000×VEV²(VSV²VTV×W)¤T=200×ΔAT¨ΔAS¨W

• 셀량

단위 정의: 효소 활성 1단위는 반응 시스템에서 분당 1nmol의 GSH 산화를 촉매하는 효소의 양으로 정의됩니다., 모든 104 세포.

GPX(U/104셀) =ΔAT ¼(ΔAS nn CS)×1000×VEV²(N×VSV²VTV)¤T=200×ΔAT¨ΔAS¨N

• 액체량:

단위 정의: 효소 활성의 1단위는 산화를 촉매하는 효소의 양으로 정의됩니다. 1 반응 시스템에서 분당 GSH의 nmol, 액체 1밀리리터마다.

GPX (U/mL)=ΔAT ¼(ΔAS nn CS)×1000×VEV²VS²T=200×ΔATnnΔAS.

CS: 표준 혼합물의 농도, 0.08 μmol/mL;

VEV: 효소 반응 시스템의 부피, 1.25밀리리터;

VSV: 시료 혼합물에 포함된 시료량, 0.1 밀리리터; VTV: 추출용액량, 1 밀리리터;

심폐소생술: 상층액 단백질 농도, mg/mL;

티: 반응 시간, 5 분;

N: 세포의 양, 수만의; 여: 샘플 중량, g;

1000: 1 μmol=1000nmol.

메모:

1. 흡광도가 더 클 때 1.2, 추출액으로 희석한 후 시료를 결정하는 것이 좋습니다.
2. 한 번에 너무 많은 샘플을 채취하지 않는 것이 좋습니다., 색상 개발에 너무 긴 테스트 시간의 영향을 피하기 위해, 결정이 그렇지 않을 수도 있습니다.

실험적 사례：

• 쥐의 간 0.1g을 섭취하세요., 추출용액 1mL를 첨가한다, 균질화하다, 그리고 갈기. 상층액을 취한다, 그것을 희석하다 40 타임스, 측정값에 따라 테스트합니다. AT=0.108을 계산합니다., 교류=0.303, AS=0.491AB=0.033,ΔAT=AC-AT=0.195 ΔAS= AS-AB=0.458, 샘플 중량에 따른 효소 활성 계산:

GPX (U/g 중량)=200×ΔAT²ΔAS²W×40(희석배율)=34061U/g.

• 포플러잎 1g을 섭취하세요., 추출용액 1mL를 첨가한다, 균질화하다, 그리고 갈기. AT=0.220 계산, 교류=0.318, AS=0.491, AB=0.033, ΔAT=AC-AT=0.098,ΔAS=AB-AB=0.458, 샘플 중량에 따른 효소 활성 계산:

GPX (U/g 중량)=200×ΔATΔASW=428U/g.