Solarbio Ribulose 1 5-bisphosphate carboxylase/oxygénase (Rubisco) Kit d'analyse

Note: Prélevez deux ou trois échantillons différents pour la prédiction avant le test.

Équipement d'exploitation: Spectrophotomètre

Chat non: BC0440

Taille:50T/48S

Composants:

• Ribulose 1,5-bisphosphate carboxylase / oxygénase (Rubisco) est une enzyme clé de la photosynthèse végétale.
• Il contrôle la fixation du dioxyde de carbone et régule le flux de carbone dans le cycle de Calvin et la photororespiration.
• L'activité de Rubisco influence directement le taux photosynthétique.
• Rubisco catalyse la combinaison de ribulose-1,5-diphosphate (Rubp) et dioxyde de carbone pour produire du 3-phosphoglycérate (PGA).
• PGA est en outre converti en glycéraldéhyde-3-phosphate, accompagné d'oxydation du NADH pour former NAD +.
• Nadh absorbe la lumière 340 nm, Alors que NAD + ne fait pas.
• Dans ce kit, L'activité Rubisco est déterminée en mesurant la diminution de l'absorbance NADH à 340 nm.

Réactifs et équipements requis mais non fournis:

Spectrophotomètre ultraviolet, centrifugeuse de bureau, pipette réglable, bain d'eau, 1 CUVETTE ML, mortier/homogénéisateur, glace, eau distillée.

Procédure:

La préparation des échantillons:

• • Bactéries ou cellules:
    • Recueillir des bactéries ou des cellules dans un tube à centrifugeuses et une centrifugeuse pour jeter le surnageant.
    • Ajouter 1 ml de solution d'extrait 5 millions de bactéries ou de cellules.
    • Utiliser des ultrasons (sur la glace, 20% pouvoir, 3 secondes, 10 secondes, répété 30 fois) aux bactéries ou aux cellules.
    • Centrifuger à 10000 ×g pour 10 minutes à 4 ° C pour éliminer les matériaux insolubles et récupérer le surnageant sur la glace pour tester.
  • Tissu:
    • Ajouter 1 ml de solution d'extrait 0.1 g de tissu (Échantillons de plantes de préférence frais) et homogénéiser sur la glace.
    • Centrifuger à 10000 ×g pour 10 minutes à 4 ° C pour éliminer les matériaux insolubles, et récupérer le surnageant sur la glace pour tester.

Procédure de détermination:

• • • • Préchauffer le spectrophotomètre UV pour 30 minutes et ajuster la longueur d'onde à 340 nm. Zéro l'instrument avec de l'eau distillée.
      • Ajouter les réactifs suivants:

Réactif (µL)	Tube à essai (T)	Tube vierge (B)
Échantillon	100	–
eau distillée	–	100
Réactif III	35	35
Réactif IV	35	35
Solution de travail	900	900

Détecter l'absorbance à 340 NM à l'époque des 20 et 5min20, Enregistrer respectivement en tant qu'A1 et A2. ΔA(T)= A2(T)-A1(T), ΔA(B)= A2(B)-A1(B), ΔA = ΔA(T)-ΔA(B). Maintenu à 25 ℃ pendant la réaction. Les tubes vierges ne doivent être testés qu'une ou deux fois.

Calcul:

Exemple expérimental:

Prendre 0,1 g de feuilles végétales, ajouter 1 ML de solution d'extrait pour l'homogénéisation, prends le surnageant, puis opérer selon les étapes de détermination.

Mesurez avec la cuvette micro-quartz et calculez

Δat = at1-at2 = 1,279-1,206 = 0,073, ΔAB = AB1 - AB2 = 0,834-0,823 = 0,011,

ΔA = Δat -ΔAB = 0,073-0,011 = 0,062

Activité Rubisco (U/g masse) = 344 × ΔA ÷ W = 344 × 0,062 ÷ 0,1 = 213,28 U / G Masse.

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