บันทึก: ใช้ตัวอย่างที่แตกต่างกันสองหรือสามตัวอย่างเพื่อทำนายก่อนการทดสอบ.
อุปกรณ์การดำเนินงาน: สเปกโตรโฟโตมิเตอร์
หมายเลขแมว: BC0440
ขนาด:50ที/48ส
ส่วนประกอบ:
- Ribulose 1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase (รูบิสโก) is a key enzyme in plant photosynthesis.
- It controls carbon dioxide fixation and regulates the flow of carbon into the Calvin cycle and photorespiration cycle.
- The activity of Rubisco directly influences the photosynthetic rate.
- Rubisco catalyzes the combination of ribulose-1,5-diphosphate (RuBP) and carbon dioxide to produce 3-phosphoglycerate (PGA).
- PGA is further converted into glyceraldehyde-3-phosphate, accompanied by NADH oxidation to form NAD+.
- NADH absorbs light at 340 นาโนเมตร, while NAD+ does not.
- ในชุดนี้, Rubisco activity is determined by measuring the decrease in NADH absorbance at 340 นาโนเมตร.
รีเอเจนต์และอุปกรณ์ที่จำเป็นแต่ไม่ได้จัดเตรียมไว้ให้:
Ultraviolet spectrophotometer, เครื่องหมุนเหวี่ยงบนโต๊ะ, ปิเปตแบบปรับได้, อ่างอาบน้ำ, 1 mL quartz cuvette, ปูน/โฮโมจีไนเซอร์, น้ำแข็ง, น้ำกลั่น.
ขั้นตอน:
การจัดเตรียมตัวอย่าง:
-
- Bacteria or Cells:
- Collect bacteria or cells into a centrifuge tube and centrifuge to discard the supernatant.
- เพิ่ม 1 สารละลายสารสกัดจาก ML ถึง 5 million bacteria or cells.
- Use ultrasonication (on ice, 20% พลัง, 3 seconds on, 10 seconds off, repeated 30 ครั้ง) to lyse bacteria or cells.
- เครื่องปั่นแยกที่ 10000 ×กรัม สำหรับ 10 minutes at 4°C to remove insoluble materials and collect the supernatant on ice for testing.
- เนื้อเยื่อ:
- เพิ่ม 1 สารละลายสารสกัดจาก ML ถึง 0.1 กรัมของเนื้อเยื่อ (preferably fresh plant samples) and homogenize on ice.
- เครื่องปั่นแยกที่ 10000 ×กรัม สำหรับ 10 minutes at 4°C to remove insoluble materials, and collect the supernatant on ice for testing.
- Bacteria or Cells:
Determination Procedure:
-
-
-
- Preheat the UV spectrophotometer for 30 minutes and adjust the wavelength to 340 นาโนเมตร. Zero the instrument with distilled water.
- Add the following reagents:
-
-
| รีเอเจนต์ (ไมโครลิตร) | หลอดทดลอง (ต) | หลอดเปล่า (บี) |
| ตัวอย่าง | 100 | – |
| น้ำกลั่น | – | 100 |
| รีเอเจนต์ III | 35 | 35 |
| รีเอเจนต์ IV | 35 | 35 |
| วิธีแก้ปัญหาการทำงาน | 900 | 900 |
Detect the absorbance at 340 nm at the time of 20s and 5min20s, record as A1 and A2 respectively. ∆A(ต)=A2(ต)-A1(ต), ∆A(บี)= A2(บี)-A1(บี), ΔA=ΔA(ต)-∆A(บี). Kept at 25℃ during the reaction. Blank tubes only need to be tested once or twice.
การคำนวณ:
ตัวอย่างการทดลอง:
Take 0.1g of plant leaves, เพิ่ม 1 mL of Extract solution for homogenization, เอาส่วนเหนือตะกอนไป, แล้วดำเนินการตามขั้นตอนที่กำหนด.
Measure with micro quartz cuvette and calculate
ΔAT= AT1-AT2=1.279-1.206=0.073, ΔAB=AB1–AB2=0.834-0.823=0.011,
ΔA= ΔAT -ΔAB=0.073-0.011=0.062
Rubisco activity (มวลยู/กรัม) - 344 × ΔA ÷ W =344×0.062÷0.1=213.28 U/g mass.
สินค้าที่เกี่ยวข้อง:
BC0310/BC0315 Coenzyme I NAD(ชม) ชุดทดสอบเนื้อหา
BC1030/BC1035 NAD Kinase (NADK) ชุดทดสอบกิจกรรม
BC0630/BC0635 NADH Oxidase (NOX) ชุดทดสอบกิจกรรม
BC1130/BC1135 NAD Malic Enzyme (NAD-ME) ชุดทดสอบกิจกรรม
รีวิว
ยังไม่มีบทวิจารณ์