Bilješka: Uzmite dva ili tri različita uzorka za predviđanje prije testa.
Operativna oprema: Spektrofotometar
Mačka ne: BC0440
Veličina:50T/48s
Komponente:
- Ribuloza 1,5-bisfosfat karboksilaza/oksigenaza (Rubisco) je ključni enzim u biljnoj fotosintezi.
- Kontrolira fiksaciju ugljičnog dioksida i regulira protok ugljika u Calvin ciklus i ciklus fotorespiracije.
- Aktivnost Rubisca izravno utječe na fotosintetsku brzinu.
- Rubisco katalizira kombinaciju ribuloze-1,5-difosfata (Rubp) i ugljični dioksid za proizvodnju 3-fosfoglicerata (PGA).
- PGA se dalje pretvara u gliceraldehid-3-fosfat, u pratnji NADH oksidacije u formiranje NAD+.
- NADH apsorbira svjetlost na 340 NM, Dok NAD+ ne.
- U ovom kompletu, Rubisco aktivnost određuje se mjerenjem smanjenja apsorpcije NADH na 340 NM.
Potrebni reagensi i oprema, ali nisu pruženi:
Ultraljubičasti spektrofotometar, stolna centrifuga, Podesiva pipeta, vodena kupelji, 1 ML kvarcna kiveta, minobacač/homogenizator, led, destilirana voda.
Postupak:
Priprema uzorka:
-
- Bakterije ili stanice:
- Prikupiti bakterije ili stanice u cijev centrifuge i centrifugu da biste odbacili supernatanta.
- Dodati 1 ml otopine ekstrakta u 5 milijun bakterija ili stanica.
- Koristite ultrazvuku (na ledu, 20% vlast, 3 sekunde na, 10 sekunde, ponovljen 30 vrijeme) do lise bakterija ili stanica.
- Centrifuga na 10000 × g za 10 minuta na 4 ° C za uklanjanje netopljivih materijala i prikupljanje supernatanta na ledu za testiranje.
- Tkivo:
- Dodati 1 ml otopine ekstrakta u 0.1 g tkiva (po mogućnosti svježi uzorci biljaka) i homogenizirati na ledu.
- Centrifuga na 10000 × g za 10 minuta na 4 ° C za uklanjanje netopljivih materijala, i prikupite supernatant na ledu za testiranje.
- Bakterije ili stanice:
Postupak određivanja:
-
-
-
- Zagrijte UV spektrofotometar za 30 minute i podesite valnu duljinu na 340 NM. Nula instrumenta destiliranom vodom.
- Dodajte sljedeće reagense:
-
-
| Reagens (μL) | Epruveta (T) | Prazna cijev (B) |
| Uzorak | 100 | – |
| destilirana voda | – | 100 |
| Reagens iii | 35 | 35 |
| Reagens IV | 35 | 35 |
| Radno rješenje | 900 | 900 |
Otkriti apsorbanciju na 340 nm u vrijeme 20 -ih i 5min20s, zabilježiti kao A1 i A2. ΔA(T)= A2(T)-A1(T), ΔA(B)= A2(B)-A1(B), ΔA = ΔA(T)-ΔA(B). Zadržao se na 25 ℃ tijekom reakcije. Prazne cijevi trebaju se testirati samo jednom ili dva puta.
Izračunavanje:
Eksperimentalni primjer:
Uzmite 0,1 g lišća biljaka, dodati 1 ML otopine ekstrakta za homogenizaciju, uzmi supernatanta, a zatim djeluju prema koracima određivanja.
Izmjerite s mikro kvarcnom kivetom i izračunajte
ΔAT = AT1-AT2 = 1,279-1,206 = 0,073, ΔAb = AB1-Ab2 = 0,834-0,823 = 0,011,
ΔA = ΔAT -ΔAB = 0,073-0,011 = 0,062
Rubisco aktivnost (U/g masa) = = 344 × ΔA ÷ w = 344 × 0,062 ÷ 0,1 = 213,28 U/g masa.
Povezani proizvodi:
BC0310/BC0315 COENZYME I Nad(H) Komplet za ispitivanje sadržaja
BC1030/BC1035 NAD kinaza (Narednica) Kit za ispitivanje aktivnosti
BC0630/BC0635 NADH oksidaza (Nox) Kit za ispitivanje aktivnosti
BC1130/BC1135 NAD ENZIM (Ne) Kit za ispitivanje aktivnosti
Recenzije
Još nema recenzija.