ARN total végétal complexe (plus) Kit d'extraction de petite quantité

1. Composants du kit de réactifs

Caractéristiques	50T	100T
Chat. Non.	SN0305PD	SN0306PD
Colonnes d'extraction d'ARN (ensemble)	50 (ensemble)	100 (ensemble)
Colonnes de nettoyage d'ADN (ensemble)	50 (ensemble)	100 (ensemble)
Inhibitor Removal Purification Columns (ensemble)	50 (ensemble)	100 (ensemble)
Extraction d'ARN Buffer I	30 ml	2×30 ml
Tampon d'élimination des inhibiteurs	30 ml	2×30 ml
Tampon de lavage 1	15 ml	2×15 ml
Tampon d'élution	20 ml	20 ml
Manuel d'instructions	1	1

2. Stockage

This reagent kit can be stored at room temperature (15-25℃) dans un environnement sec et est stable pendant 12 mois.

3. Instructions d'utilisation du kit de réactifs

3.1 Ce kit est destiné à des fins de recherche en biologie moléculaire et ne doit pas être utilisé pour le diagnostic ou le traitement de maladies..

3.2 Certains composants du kit contiennent des irritants; il est conseillé de prendre les précautions nécessaires (comme porter des vêtements de protection et des lunettes).

3.3 L'utilisation de ce kit nécessite un équipement supplémentaire tel qu'une centrifugeuse à grande vitesse, bain d'eau (bain en métal), mélangeur de vortex, éthanol anhydre, l'azote liquide, chloroforme, eau déminéralisée stérile, et tubes EP.

4. Introduction au kit de réactifs

This RNA purification reagent kit provides a fast and effective purification of plant total RNA containing polysaccharides, lipides, polyphenols, and other components. It is suitable for most complex plant tissues. En général, lipid-rich plant tissues contain a high content of lipid compounds, which significantly affect RNA extraction efficiency. This kit utilizes exclusive inhibitor removal columns to effectively eliminate lipids from plant samples, as well as to remove DNA contamination. If the experiment is sensitive to DNA, it is recommended to use intron-spanning primers for downstream experiments.

 

The RNA rapid purification reagent kit can extract plant total RNA (y compris l'ARN nucléaire et l'ARN cytoplasmique) dans 1 heure. L'ARN extrait peut être directement utilisé pour la RT-RAP, Transfert du Nord, etc.. The entire purification process does not require toxic reagents such as chloroform, making the RNA purification reagent kit suitable for various other samples.

5. Principes et procédures expérimentaux

6. Processus d'extraction

Précautions avant de commencer l'expérience:

UN. Laver Tampon 1: Avant usage, add the specified amount of absolute ethanol as indicated on the reagent bottle label. Check the label to confirm the addition of absolute ethanol.

B. Le tampon d'élution est un 0.1x solution TE avec une quantité minimale d'EDTA. If EDTA may affect subsequent experiments, it is recommended to replace the elution buffer with sterile deionized water.

C. Tampon d'extraction d'ARN I contains a small amount of phenol, which may precipitate. Avant utilisation, mix thoroughly by warming in a water bath; after use, store away from light.

 

1. Traitement des échantillons:

UN. Collecte et stockage des matériaux:

If freshly collected materials cannot be immediately used, place them in liquid nitrogen and store them at -80℃.

B. Whenever possible, collect fresh materials as they contain fewer polysaccharides and polyphenols.

2. Grind approximately 100 mg of fresh samples or not more than 20 mg of dry material with liquid nitrogen.

3. Ajouter 600μl of RNA Extraction Buffer I, ensuring there are no tissue clumps in the ground sample. Tissue clumps are difficult to lyse and can reduce RNA yield.

4. Vortex pour 30 s.

5. Transfer the lysate to aninhibitor removal purification column, centrifuger à 12,000 tr/min pour 5 min.

(Note: Lipid-rich plant materials may contain many lipid compounds at this step, which can affect RNA extraction. Remove these substances during this step. If buffer residue remains in the inhibitor removal purification column during centrifugation, extend centrifugation time appropriately.)

6. Transfer the obtained supernatant to a DNA removal column, centrifuger à 12,000 rpm for 30s, and collect the filtrate (Note: L'ARN est présent dans le filtrat).
7. Ajouter 250µl d'éthanol absolu, mix by pipetting. If there is a small amount of precipitation, cela n'affecte pas les expériences ultérieures. Transfer the liquid to an RNA purification column, centrifuger à 12,000 rpm for 30s, discard the flow-through.
8. Ajouter 700μl of inhibitor removal buffer, centrifuger à 12,000 rpm for 30s, discard the flow-through.
9. Ajouter 700µl de laverbuffer 1 à la colonne de purification d'ARN, centrifuger à 12,000 rpm for 30s, discard the flow-through.
10. Ajouter 500µl de laver buffer 1 à la colonne de purification d'ARN, centrifuger à 12,000 tr/min pour 3 min, discard the flow-through.
11. Place the RNA purification column into a new 1.5ml centrifuge tube, air-dry the membrane at room temperature for 2 minutes.

(Note: Confirm that absolute ethanol has been added to laver buffer 1. The presence of ethanol has a serious impact on subsequent experiments, so drying the membrane is crucial. Après centrifugation, s'assurer qu'aucun éthanol n'est présent avant l'élution, puis jetez les déchets et le tube de collecte. After washing with wash buffer 1, the membrane on the RNA purification column should have only a slight color. Après centrifugation, retirer délicatement la colonne de purification d'ARN, ensuring it does not touch the collection tube to avoid ethanol interference.)

12. Aerially pipette 50-100µl de tampon d'élution sur la membrane, centrifuger à 12,000 tr/min pour 1 min, and collect the RNA solution.

(Note: Élution de l'ARN avec 50 μl of elution buffer can increase RNA concentration but reduces total RNA yield.)