복합 식물 총 RNA (...을 더한) 소량 추출 키트

1. 시약 키트의 구성 요소

명세서	50티	100티
고양이. 아니요.	sn0305pd	sn0306pd
RNA 추출 컬럼 (세트)	50 (세트)	100 (세트)
DNA 청소 열 (세트)	50 (세트)	100 (세트)
억제제 제거 정제 컬럼 (세트)	50 (세트)	100 (세트)
RNA 추출 버퍼 i	30 밀리리터	2×30 밀리리터
억제제 제거 버퍼	30 밀리리터	2×30 밀리리터
세척 버퍼 1	15 밀리리터	2×15 밀리리터
용출 버퍼	20 밀리리터	20 밀리리터
사용 설명서	1	1

2. 저장

이 시약 키트는 실온에서 저장 될 수 있습니다 (15-25℃) 건조한 환경에서 안정적이며 12 개월.

3. 시약 키트 사용 지침

3.1 이 키트는 분자 생물학 연구 목적으로 제작되었으며 질병 진단이나 치료에 사용해서는 안 됩니다..

3.2 키트의 일부 구성품에는 자극제가 포함되어 있습니다.; 필요한 예방 조치를 취하는 것이 좋습니다 (보호복과 고글을 착용하는 등).

3.3 이 키트를 사용하려면 고속 원심분리기 등 추가 장비가 필요합니다., 욕조 (금속 욕조), 소용돌이 믹서, 무수에탄올, 액체 질소, 클로로포름, 멸균 탈이온수, 및 EP 튜브.

4. 시약 키트 소개

이 RNA 정제 시약 키트는 다당류를 함유하는 식물 총 RNA의 빠르고 효과적인 정제를 제공합니다., 지질, 폴리 페놀, 그리고 다른 구성 요소. 대부분의 복잡한 식물 조직에 적합합니다. 일반적으로, 지질이 풍부한 식물 조직은 높은 함량의 지질 화합물을 함유합니다., RNA 추출 효율에 크게 영향을 미칩니다. 이 키트는 독점 억제제 제거 컬럼을 사용하여 식물 샘플의 지질을 효과적으로 제거합니다., DNA 오염을 제거 할뿐만 아니라. 실험이 DNA에 민감한 경우, 다운 스트림 실험에 인트론 스패닝 프라이머를 사용하는 것이 좋습니다..

 

RNA 빠른 정제 시약 키트는 식물 총 RNA를 추출 할 수 있습니다. (핵 RNA 및 세포질 RNA 포함) 이내에 1 시간. 추출된 RNA를 RT에 바로 활용 가능-PCR, 노던 블로팅, 등. 전체 정제 과정에는 클로로포름과 같은 독성 시약이 필요하지 않습니다., RNA 정제 시약 키트를 다양한 다른 샘플에 적합하게 만들기.

5. 실험 원리 및 절차

6. 추출과정

실험 시작 전 주의사항:

ㅏ. 씻다 완충기 1: 사용하기 전에, 시약 병 라벨에 표시된대로 지정된 양의 절대 에탄올을 추가하십시오.. 절대 에탄올의 첨가를 확인하려면 라벨을 확인하십시오..

비. 용출 완충액은 0.1x TE 솔루션 최소한의 EDTA로. EDTA가 후속 실험에 영향을 미칠 수 있는 경우, 용리 완충액을 멸균 탈 이온수로 대체하는 것이 좋습니다..

씨. RNA 추출 완충액 i 소량의 페놀이 들어 있습니다, 침전 될 수 있습니다. 사용하기 전에, 수조에서 따뜻하게하여 철저히 섞으십시오; 사용 후, 빛에서 멀리 보관하십시오.

 

1. 샘플 처리:

ㅏ. 재료 수집 및 보관:

새로 수집 된 재료를 즉시 사용할 수없는 경우, 액체 질소에 넣고 -80 ℃에 보관하십시오..

비. 가능할 때마다, 다당류와 폴리 페놀이 적어 신선한 재료를 수집합니다..

2. 대략 갈기 100 신선한 샘플의 Mg 또는 그 이상 20 액체 질소가있는 건조 물질의 Mg.

3. 추가하다 600RNA 추출 완충액의 μl, 지상 샘플에 조직 덩어리가 없도록. 조직 덩어리는 무력화하기가 어렵고 RNA 수율을 줄일 수 있습니다..

4. 소용돌이 30 에스.

5. 용 해물을 옮깁니다 an억제제 제거 정제 컬럼, 원심분리기 12,000 rpm 5 분.

(메모: 지질이 풍부한 식물 물질은이 단계에서 많은 지질 화합물을 함유 할 수 있습니다., RNA 추출에 영향을 줄 수 있습니다. 이 단계 에서이 물질을 제거하십시오. 완충 잔기가 원심 분리 동안 억제제 제거 정제 컬럼에 남아있는 경우, 원심 분리 시간을 적절하게 연장하십시오.)

6. 얻어진 상청액을 DNA 제거 컬럼으로 옮깁니다, 원심분리기 12,000 30 대의 RPM, 여과 액을 수집하십시오 (메모: RNA는 여과 액에 존재한다).
7. 추가하다 250무수 에탄올 μl, 피펫팅으로 섞는다. 적은 양의 강수량이있는 경우, 후속 실험에는 영향을 미치지 않습니다. 액체를 RNA 정제 컬럼으로 옮깁니다, 원심분리기 12,000 30 대의 RPM, 흐름을 폐기하십시오.
8. 추가하다 700억제제 제거 완충액의 μl, 원심분리기 12,000 30 대의 RPM, 흐름을 폐기하십시오.
9. 추가하다 700μl의 씻다완충기 1 RNA 정제 컬럼으로, 원심분리기 12,000 30 대의 RPM, 흐름을 폐기하십시오.
10. 추가하다 500μl의 씻다 완충기 1 RNA 정제 컬럼으로, 원심분리기 12,000 rpm 3 분, 흐름을 폐기하십시오.
11. RNA 정제 컬럼을 새로운 1.5ml 원심 분리기에 배치하십시오., 실온에서 멤브레인을 공기 건조시킵니다 2 분.

(메모: 절대 에탄올이 첨가되었음을 확인하십시오 씻다 완충기 1. 에탄올의 존재는 후속 실험에 심각한 영향을 미칩니다., 막을 건조시키는 것이 중요합니다. 원심분리 후, 용출 전에 에탄올이 존재하지 않는지 확인하십시오., 그런 다음 폐기물 및 수집 튜브를 폐기하십시오.. 세척 완충제로 세척 한 후 1, RNA 정제 컬럼의 막에는 약간의 색이 있어야합니다.. 원심분리 후, RNA 정제 컬럼을 조심스럽게 제거하십시오, 에탄올 간섭을 피하기 위해 수집 튜브에 닿지 않도록.)

12. 공중 피펫 50-100용출 버퍼의 μl 멤브레인 위에, 원심분리기 12,000 rpm 1 분, RNA 용액을 수집하십시오.

(메모: RNA 용출 50 μL의 용리 완충액은 RNA 농도를 증가 시키지만 총 RNA 수율을 감소시킬 수 있습니다..)