複雑な植物のトータルRNA (プラス) 少量抽出キット

1. 試薬キットのコンポーネント

仕様	50T	100T
猫. いいえ.	SN0305PD	SN0306PD
RNA抽出カラム (セット)	50 (セット)	100 (セット)
DNAクリーンアップカラム (セット)	50 (セット)	100 (セット)
阻害剤除去精製カラム (セット)	50 (セット)	100 (セット)
RNA抽出 バッファI	30 ミリリットル	2×30 ミリリットル
阻害剤除去バッファー	30 ミリリットル	2×30 ミリリットル
洗浄バッファー 1	15 ミリリットル	2×15 ミリリットル
溶出バッファー	20 ミリリットル	20 ミリリットル
取扱説明書	1	1

2. ストレージ

この試薬キットは、室温で保管できます (15-25℃) 乾燥した環境では安定しています 12 月.

3. 試薬キットを使用するための指示

3.1 このキットは分子生物学の研究目的を目的としており、疾患の診断や治療に使用すべきではありません.

3.2 キットの一部のコンポーネントには刺激物が含まれています; 必要な予防策を講じることをお勧めします (保護服やゴーグルを着用するなど).

3.3 このキットを使用するには、高速遠心分離機などの追加の機器が必要です, 水浴 (メタルバス), 渦ミキサー, 無水エタノール, 液体窒素, クロロホルム, 滅菌脱イオン水, およびEPチューブ.

4. 試薬キットの紹介

このRNA精製試薬キットは、多糖を含む植物総RNAの迅速かつ効果的な精製を提供します, 脂質, ポリフェノール, その他のコンポーネント. ほとんどの複雑な植物組織に適しています. 一般的に, 脂質に富む植物組織には、脂質化合物の高い含有量が含まれています, RNA抽出効率に大きく影響します. このキットは、植物サンプルから脂質を効果的に排除するために、排他的な阻害剤除去カラムを利用しています, DNA汚染を除去するだけでなく. 実験がDNAに敏感である場合, 下流の実験にイントロンにまたがるプライマーを使用することをお勧めします.

 

RNA迅速浄化試薬キットは、植物総RNAを抽出できます (核RNAおよび細胞質RNAを含む) 内で 1 時間. 抽出されたRNAは、RTに直接使用できます-PCR, ノーザンブロット, 等. 精製プロセス全体では、クロロホルムなどの有毒試薬は必要ありません, RNA浄化試薬キットを他のさまざまなサンプルに適している.

5. 実験原則と手順

6. 抽出プロセス

実験を開始する前の注意事項:

あ. ウォッシュ バッファ 1: 使用する前, 試薬ボトルラベルに示されているように、指定された絶対エタノールの指定量を追加します. ラベルを確認して、絶対エタノールの追加を確認してください.

B. 溶出バッファーはaです 0.1X TEソリューション 最小限のEDTAで. EDTAが後続の実験に影響を与える可能性がある場合, 溶出緩衝液を滅菌脱イオン水に置き換えることをお勧めします.

C. RNA抽出バッファーi 少量のフェノールが含まれています, 沈殿する可能性があります. ご使用の前に, 水浴で温めて徹底的に混ぜます; 使用後, 光から離れて保管してください.

 

1. サンプル処理:

あ. マテリアルコレクションとストレージ:

収集したばかりの材料をすぐに使用できない場合, それらを液体窒素に入れて-80℃に保管します.

B. 可能な場合はいつでも, 多糖類とポリフェノールが少ないため、新鮮な材料を収集する.

2. ほぼ粉砕します 100 新鮮なサンプルのmgまたはそれ以上 20 液体窒素を含む乾燥材料のmg.

3. 追加 600μLのRNA抽出バッファーi, 接地サンプルに組織の塊がないことを確認する. 組織の塊を溶かすのは難しく、RNAの収率を減らすことができます.

4. ボルテックス 30 s.

5. 溶解物をに移します an阻害剤除去精製カラム, で遠心分離する 12,000 の回転数 5 分.

(注記: このステップでは、脂質が豊富な植物材料が多くの脂質化合物を含む場合があります, RNA抽出に影響を与える可能性があります. このステップ中にこれらの物質を除去します. 遠心分離中に緩衝剤残留物が阻害剤除去精製カラムに残っている場合, 遠心分離時間を適切に延長します.)

6. 得られた上清をDNA除去カラムに転送します, で遠心分離する 12,000 30代のRPM, ろ液を集めます (注記: RNAは濾液に存在します).
7. 追加 250絶対エタノールのμL, ピペッティングでミックスします. 少量の降水量がある場合, 後続の実験には影響しません. 液体をRNA精製カラムに移します, で遠心分離する 12,000 30代のRPM, フロースルーを破棄します.
8. 追加 700μLの阻害剤除去バッファー, で遠心分離する 12,000 30代のRPM, フロースルーを破棄します.
9. 追加 700μlの 洗うバッファ 1 RNA精製カラムに, で遠心分離する 12,000 30代のRPM, フロースルーを破棄します.
10. 追加 500μlの 洗う バッファ 1 RNA精製カラムに, で遠心分離する 12,000 の回転数 3 分, フロースルーを破棄します.
11. RNA精製カラムを新しい1.5ml遠心分離機に配置します, 室温で膜を空気乾燥させます 2 分.

(注記: 絶対エタノールが追加されていることを確認してください 洗う バッファ 1. エタノールの存在は、その後の実験に深刻な影響を及ぼします, したがって、膜を乾燥させることが重要です. 遠心分離後, 溶出前にエタノールが存在しないことを確認してください, 次に、廃棄物と収集チューブを廃棄します. 洗浄バッファーで洗浄した後 1, RNA精製カラムの膜はわずかな色しか持たないはずです. 遠心分離後, RNA精製カラムを慎重に取り外します, エタノールの干渉を避けるために、コレクションチューブに触れないようにしてください.)

12. 空中ピペット 50-100μLの溶出緩衝液 膜に, で遠心分離する 12,000 の回転数 1 分, RNA溶液を収集します.

(注記: RNAを溶出します 50 μLの溶出バッファーはRNA濃度を増加させる可能性がありますが、RNAの総収率を減少させる可能性があります.)