Kit d'extraction d'ADN du génome bactérien

• Composants du kit de réactifs

• Stockage

Ce kit de réactifs doit être conservé à température ambiante (15-25℃) et dans des conditions sèches, avec une durée de conservation de 12 mois. Les colonnes de purification par extraction d'ADN peuvent être stockées pendant 1 année dans un environnement frais et sec. Lysozyme, Protéinase k et rnase A contiennent des conservateurs, permettant le transport à température ambiante, mais pour un stockage à long terme, ils doivent être conservés à -20℃.

• Instructions d'utilisation du kit de réactifs

3.1 Ce kit de réactifs est destiné à la recherche en biologie moléculaire et ne doit pas être utilisé pour le diagnostic ou le traitement de maladies..

3.2 Certains composants du kit de réactifs contiennent des irritants. Des mesures de protection telles que le port de vêtements et de lunettes de protection sont recommandées.

3.3 Pendant l'utilisation de ce kit de réactifs, une centrifugeuse à grande vitesse, bain d'eau (bain en métal), mélangeur de vortex, éthanol anhydre, eau déminéralisée stérile, et les tubes EP doivent être préparés par l'utilisateur.

• Introduction au kit de réactifs

Ce kit fournit une méthode de purification rapide et efficace pour isoler l'ADN de divers fluides corporels et fluides de culture bactérienne. Il utilise une colonne de purification à base de silicium qui adsorbe sélectivement les acides nucléiques. Avec des solutions de tampon spécifiques, Les échantillons d'ADN bactérien peuvent être extraits à l'intérieur 30 minutes. L'ensemble du processus de purification ne nécessite pas de réactifs toxiques tels que le phénol-chloroforme. L'ADN extrait peut être directement utilisé pour des expériences en aval comme RAP, Southern Blot, et d'autres.

• Principes et procédures expérimentaux

• Processus d'extraction

Avant de commencer l'expérience:

1. Tampon réactif B et C peut précipiter dans des conditions de basse température. Nous recommandons de chauffer à 65 ℃ pendant 5 minutes. Après dissolution du précipité, il peut être utilisé normalement.
2. Avant utilisation, ajouter la quantité spécifiée d'éthanol anhydre à Tampon de lavage 1comme indiqué sur l'étiquette du flacon. Cochez l'étiquette pour indiquer l'ajout d'éthanol anhydre..
3. Le tampon d'élution est un0.1x solution TEcontenant des quantités minimales d'EDTA. Si l'EDTA peut affecter les expériences ultérieures, il est conseillé de remplacer le tampon d'élution par de l'eau déionisée stérile.
4. Manipulation des échantillons:
5. Prendre autour de 1 ML de la culture bactérienne, centrifuger à 12,000 tr/min pour 1 minute, aspirer le surnageant autant que possible, ajouter 200μl de tampon réactif bà la solution de cellules bactériennes. En général, L'ARN résiduel a un impact minimal sur les expériences en aval. Si l'interférence de l'ARN doit être éliminée, ajouter 10μl de RNASEA (10mg/ml) au mélange, incuber à 37 ° C pour 2 Minutes avec du vortex pendant la période.
6. Si l'échantillon traité contient des bactéries à Gram positif, ajouter 10μl de lysozyme (10 mg/ml)et 200μl de tampon réactif b. En général, L'ARN résiduel a un impact minimal sur les expériences en aval. Si l'interférence de l'ARN doit être éliminée, ajouter 10μl de RNASEA (10mg/ml) au mélange, incuber à 37 ° C pour 15-30 Minutes avec du vortex pendant la période.
7. Ajouter 10μl de protéinase k (10 mg/ml), Inversé et mélanger complètement, digérer à 65 ° C pour 2 minutes. Pendant cette période, Inversez et mélangez la solution d'échantillon 6-7 fois jusqu'à ce que la solution d'échantillon devienne claire après la digestion.
8. Ajouter 200μl de tampon réactif Cau lysat et mélanger. Si un précipité blanc apparaît, il peut être laissé pour s'installer; Cela n'affectera pas les expériences ultérieures une fois que le précipité disparaîtra.
9. Ajouter 200μl d'éthanol, bien mélanger. Certaines précipitations peuvent survenir mais n'affecteront pas les expériences ultérieures.
10. Transférer le liquide obtenu dans une colonne de purification d'extraction d'ADN, laisser à température ambiante pour 2 minutes, centrifuger à 12,000 tr/min pour 30 secondes. Jetez les déchets collectés et réinsérez le tube de collecte dans la colonne de purification pour l'étape suivante.
11. Ajouter 600µl de tampon de lavage 1, centrifuger à 12,000 tr/min pour 30 secondes, jeter les déchets, et réinsérez la colonne de purification d'extraction d'ADN dans le support.

(Note: Assurez-vous que l'éthanol a été ajouté au tampon de lavage 1.)

7. Ajouter 500µl de tampon de lavage 1 à la colonne de purification d'extraction d'ADN, centrifuger à 12,000 tr/min pour 2 minutes, prolonger le temps de centrifugation au besoin pour une membrane plus sèche.
8. Placer la colonne de purification d'extraction d'ADN (titulaire) dans un nouveau tube à centrifuger, ouvrir, et chauffer à 65°C pendant 2 minutes. Étendre cette étape au besoin pour évaporer l'éthanol, Empêcher les résidus d'éthanol d'affecter les expériences en aval.
9. Ajouter 50-100µl de tampon d'élutionsur la membrane de colonne, centrifuger à 12,000 tr/min pour 2 minutes.

(Note: 1. Élution de l'ADN avec 50 μL de tampon d'élution peut augmenter la concentration d'ADN mais réduire le rendement total de l'ADN. 2. L'ADN élué de l'éluat peut être réappliqué à la colonne de purification d'extraction d'ADN, centrifuger à nouveau à 12,000 tr/min pour 2 Minutes pour améliorer le rendement de l'ADN.)