Kit Ekstraksi DNA Genom Bakteri

• Komponen kit reagen

• Penyimpanan

Kit reagen ini harus disimpan pada suhu kamar (15-25℃) dan dalam kondisi kering, dengan umur simpan 12 bulan. Kolom pemurnian ekstraksi DNA dapat disimpan 1 tahun di lingkungan sejuk dan kering. Lisozim, Proteinase K dan RNase A mengandung pengawet, memungkinkan transportasi pada suhu kamar, tapi untuk penyimpanan jangka panjang, mereka harus disimpan pada -20℃.

• Petunjuk Penggunaan Kit Reagen

3.1 Kit reagen ini ditujukan untuk penelitian biologi molekuler dan tidak boleh digunakan untuk diagnosis atau pengobatan penyakit.

3.2 Beberapa komponen dalam kit reagen mengandung bahan iritan. Tindakan perlindungan seperti mengenakan pakaian pelindung dan kacamata direkomendasikan.

3.3 Selama penggunaan kit reagen ini, mesin sentrifugal berkecepatan tinggi, mandi air (mandi logam), pencampur pusaran, etanol anhidrat, air deionisasi steril, dan tabung EP perlu disiapkan oleh pengguna.

• Pengantar Kit Reagen

Kit ini memberikan metode pemurnian yang cepat dan efektif untuk mengisolasi DNA dari berbagai cairan tubuh dan cairan kultur bakteri. Ini menggunakan kolom pemurnian berbasis silikon yang secara selektif menyerap asam nukleat. Dengan solusi buffer spesifik, Sampel DNA bakteri dapat diekstraksi di dalam 30 menit. Seluruh proses pemurnian tidak memerlukan reagen beracun seperti fenol-kloroform. DNA yang diekstraksi dapat langsung digunakan untuk percobaan hilir seperti PCR, Blot Selatan, dan lain-lain.

• Prinsip dan Prosedur Eksperimental

• Proses Ekstraksi

Sebelum Memulai Eksperimen:

1. Buffer reagen b dan c dapat mengendap pada kondisi suhu rendah. Kami merekomendasikan pemanasan di 65 ℃ untuk 5 menit. Setelah endapan larut, itu bisa digunakan secara normal.
2. Sebelum digunakan, Tambahkan jumlah etanol anhidrat yang ditentukan Cuci Buffer 1seperti yang ditunjukkan pada label botol. Tandai cek pada label untuk menunjukkan penambahan etanol anhidrat.
3. Buffer Elusi adalah a0.1x solusi TEmengandung jumlah minimal EDTA. Jika EDTA mungkin mempengaruhi percobaan selanjutnya, Dianjurkan untuk mengganti buffer elusi dengan air deionisasi steril.
4. Penanganan Sampel:
5. Mengambil sekitar 1 ML kultur bakteri, sentrifugasi di 12,000 rpm untuk 1 menit, aspirasi supernatan sebanyak mungkin, menambahkan 200μl Reagen Buffer Bke larutan sel bakteri. Umumnya, RNA residual memiliki dampak minimal pada percobaan hilir. Jika gangguan RNA perlu dihilangkan, menambahkan 10μl RNASEA (10mg/ml) ke campuran, Inkubasi pada suhu 37 ° C untuk 2 Menit dengan vortexing selama periode tersebut.
6. Jika sampel yang sedang diproses mengandung bakteri gram-positif, menambahkan 10μl lisozim (10 mg/ml)Dan 200μl Reagen Buffer B. Umumnya, RNA residual memiliki dampak minimal pada percobaan hilir. Jika gangguan RNA perlu dihilangkan, menambahkan 10μl RNASEA (10mg/ml) ke campuran, Inkubasi pada suhu 37 ° C untuk 15-30 Menit dengan vortexing selama periode tersebut.
7. Menambahkan 10μl proteinase k (10 mg/ml), membalikkan dan mencampur secara menyeluruh, dicerna pada 65 ° C untuk 2 menit. Selama periode ini, membalikkan dan mencampur solusi sampel 6-7 kali sampai solusi sampel menjadi jelas setelah pencernaan.
8. Menambahkan 200μl Reagen Buffer Cke lisat dan campur. Jika muncul endapan putih, itu bisa dibiarkan menyelesaikan; itu tidak akan mempengaruhi percobaan selanjutnya begitu endapan menghilang.
9. Menambahkan 200μl etanol, aduk rata. Beberapa presipitasi mungkin terjadi tetapi tidak akan mempengaruhi percobaan selanjutnya.
10. Pindahkan cairan yang diperoleh ke kolom pemurnian ekstraksi DNA, Biarkan pada suhu kamar untuk 2 menit, sentrifugasi di 12,000 rpm untuk 30 detik. Buang limbah yang dikumpulkan dan memasukkan kembali tabung pengumpulan ke kolom pemurnian untuk langkah berikutnya.
11. Menambahkan 600μl Buffer Cuci 1, sentrifugasi di 12,000 rpm untuk 30 detik, membuang limbahnya, dan memasukkan kembali kolom pemurnian ekstraksi DNA ke dalam pemegang.

(Catatan: Pastikan etanol telah ditambahkan ke buffer cuci 1.)

7. Menambahkan 500μl Buffer Cuci 1 ke kolom pemurnian ekstraksi DNA, sentrifugasi di 12,000 rpm untuk 2 menit, Memperluas waktu sentrifugasi sesuai kebutuhan untuk membran yang lebih kering.
8. Tempatkan kolom pemurnian ekstraksi DNA (pemegang) ke dalam tabung centrifuge yang baru, membuka, dan panaskan pada suhu 65°C selama 2 menit. Perpanjang langkah ini seperlunya untuk menguap etanol, mencegah residu etanol yang mempengaruhi percobaan hilir.
9. Menambahkan 50-100μl Buffer Elusike membran kolom, sentrifugasi di 12,000 rpm untuk 2 menit.

(Catatan: 1. Mengelusi DNA dengan 50 μl buffer elusi dapat meningkatkan konsentrasi DNA tetapi mengurangi total hasil DNA. 2. DNA yang dielusi dari eluat dapat diterapkan kembali ke kolom pemurnian ekstraksi DNA, Centrifuge lagi di 12,000 rpm untuk 2 Menit untuk meningkatkan hasil DNA.)