Kit per l'estrazione del DNA del genoma batterico

• Componenti del kit di reagenti

• Magazzinaggio

Questo kit di reagenti deve essere conservato a temperatura ambiente (15-25℃) e in condizioni asciutte, con una durata di conservazione di 12 mesi. Le colonne di purificazione per l'estrazione del DNA possono essere conservate per 1 anno in un ambiente fresco e asciutto. Lisozima, Proteinasi K e RNasi A contengono conservanti, consentendo il trasporto a temperatura ambiente, ma per la conservazione a lungo termine, dovrebbero essere mantenuti a -20 ℃.

• Istruzioni per l'uso del kit di reagenti

3.1 Questo kit di reagenti è destinato alla ricerca di biologia molecolare e non deve essere utilizzato per la diagnosi o il trattamento di malattie.

3.2 Alcuni componenti del kit di reagenti contengono sostanze irritanti. Si raccomandano misure protettive come indossare indumenti protettivi e occhiali protettivi.

3.3 Durante l'utilizzo di questo kit di reagenti, una centrifuga ad alta velocità, bagnomaria (bagno di metallo), miscelatore a vortice, etanolo anidro, acqua deionizzata sterile, e le provette EP devono essere preparate dall'utente.

• Introduzione al kit di reagenti

This kit provides a rapid and effective purification method for isolating DNA from various bodily fluids and bacterial culture fluids. It utilizes a silicon-based purification column that selectively adsorbs nucleic acids. With specific buffer solutions, bacterial DNA samples can be extracted within 30 minuti. L'intero processo di purificazione non richiede reagenti tossici come il fenolo-cloroformio. The extracted DNA can be directly used for downstream experiments like PCR, Southernblotting, e altri.

• Principi e procedure sperimentali

• Processo di estrazione

Prima di iniziare l'esperimento:

1. Tampone reagente B e C può precipitare in condizioni di bassa temperatura. Si consiglia di riscaldare a 65 ℃ per 5 minuti. Dopo che il precipitato si è sciolto, può essere utilizzato normalmente.
2. Prima dell'uso, aggiungere la quantità specificata di etanolo anidro Tampone di lavaggio 1come indicato sull'etichetta della bottiglia. Contrassegnare un segno di spunta sull'etichetta per indicare l'aggiunta di etanolo anidro.
3. Il tampone di eluizione è un0.1x soluzione TEcontenente quantità minime di EDTA. Se l'EDTA potrebbe influenzare gli esperimenti successivi, è consigliabile sostituire il tampone di eluizione con acqua deionizzata sterile.
4. Gestione dei campioni:
5. Take around 1 ml of bacterial culture, centrifugare a 12,000 giri al minuto per 1 minuto, aspirare quanto più possibile il surnatante, aggiungere 200μl of Reagent Buffer Bto the bacterial cell solution. Generalmente, residual RNA has minimal impact on downstream experiments. If RNA interference needs to be eliminated, aggiungere 10μl of RNaseA (10mg/ml) to the mixture, incubate at 37°C for 2 minutes with vortexing during the period.
6. If the sample being processed contains Gram-positive bacteria, aggiungere 10μl of Lysozyme (10 mg/ml)E 200μl of Reagent Buffer B. Generalmente, residual RNA has minimal impact on downstream experiments. If RNA interference needs to be eliminated, aggiungere 10μl of RNaseA (10mg/ml) to the mixture, incubate at 37°C for 15-30 minutes with vortexing during the period.
7. Aggiungere 10μl of Proteinase K (10 mg/ml), thoroughly invert and mix, digest at 65°C for 2 minuti. Durante questo periodo, invert and mix the sample solution 6-7 times until the sample solution becomes clear after digestion.
8. Aggiungere 200μl of Reagent Buffer Cto the lysate and mix. If a white precipitate appears, it can be left to settle; it won’t affect subsequent experiments once the precipitate disappears.
9. Aggiungere 200μl of ethanol, mescolare accuratamente. Some precipitation might occur but won’t affect subsequent experiments.
10. Transfer the obtained liquid into a DNA extraction purification column, lasciare a temperatura ambiente per 2 minuti, centrifugare a 12,000 giri al minuto per 30 secondi. Discard the collected waste and reinsert the collection tube into the purification column for the next step.
11. Aggiungere 600ml di tampone di lavaggio 1, centrifugare a 12,000 giri al minuto per 30 secondi, scartare i rifiuti, and reinsert the DNA extraction purification column into the holder.

(Nota: Ensure ethanol has been added to Wash Buffer 1.)

7. Aggiungere 500ml di tampone di lavaggio 1 alla colonna di purificazione per l'estrazione del DNA, centrifugare a 12,000 giri al minuto per 2 minuti, extending the centrifugation time as needed for a drier membrane.
8. Posizionare la colonna di purificazione per l'estrazione del DNA (holder) in una nuova provetta da centrifuga, aprire, e scaldare a 65°C per 2 minuti. Extend this step as necessary to evaporate ethanol, preventing ethanol residues from affecting downstream experiments.
9. Aggiungere 50-100μl di tampone di eluizionesulla membrana della colonna, centrifugare a 12,000 giri al minuto per 2 minuti.

(Nota: 1. Eluizione del DNA con 50 μl of Elution Buffer can increase DNA concentration but reduce the total DNA yield. 2. The eluted DNA from the eluate can be reapplied to the DNA extraction purification column, centrifugare nuovamente a 12,000 giri al minuto per 2 minutes to enhance DNA yield.)