Solarbio乳酸去氫酶 (乳酸脫氫酶) 活性測定試劑盒

乳酸脫氫酶 (乳酸脫氫酶) 活性測定試劑盒

筆記: 測試前取兩個或三個不同的樣本進行預測.

操作設備: 分光光度計/酶標儀

目錄號: BC0685

尺寸:100T/48S

成分:

萃取液: 60 毫升×1. 4℃保存；

試劑一: 7 毫升×1. 4℃保存.

試劑二: 粉末×1. -20℃保存. 工作溶液: 溶解 1.3 使用前的毫升蒸餾水. 匹配後可以將其分為小管, 可以在-20℃時保存兩個星期. 避免重複凍結和解凍週期.

試劑三: 7 毫升×1. 4℃保存.

試劑四: 25 毫升×1. 4℃保存.

丙酮酸鈉標準溶液: 1 毫升 (2 微摩爾/毫升) ×1. 4℃保存.

產品描述:

乳酸脫氫酶 (LDH或LD) 是在幾乎所有活細胞中發現的糖酵解途徑的末端酶 (動物, 植物, 和原核生物). LDH催化乳酸轉化為丙酮酸和背部, 當它轉換為NAD+向NADH和背部.

通過催化LDH將NAD+和乳酸氧化為丙酮酸. 丙酮酸進一步與2,4-二硝基苯基氫氮雜形成形成丙酮酸二硝基苯, 在鹼性溶液中顯示棕色紅色，顏色深度與丙酮酸的濃度成正比.

需要但未提供的試劑和設備:

分光光度計/酶標儀, 恆溫器水浴, 桌上型離心機, 可調式移液器, 微型玻璃比色皿/96孔平底板, 研缽/均質器, 冰, 蒸餾水.

程式:

我. 樣本 準備:

1. 細菌, 細胞, 或組織樣品:

細菌或細胞:

將細菌或細胞收集到離心管中. 離心後丟棄上層的液體. 細菌/細胞量的比率 (104): 萃取液體積 (毫升) 是500~1000:1(建議採取約 5 萬個細菌/細胞並添加 1 萃取液毫升數). 細菌和細胞被超聲分割 (置於冰上, 200瓦, 工作時間3s, 間隔10秒, 重複 30 次). 離心機在 8000 rpm 4℃ 10 分分鐘, 拿上清液並將其放在冰上進行測試.

組織:

依組織質量的比例進行冰浴均質 (G): 萃取液體積 (毫升) = 1: 5〜10 (建議您接受 0.1 g 組織並加入 1 萃取液毫升數). 冰浴均勻化. 離心機在 8000 rpm 和 4℃ 10 分分鐘, 拿上清液並將其放在冰上進行測試.

2. 血清 (電漿)樣本:

直接檢測樣品.

二. 程式:

1. 預熱分光光度計/微調讀取器 30 分分鐘, 調整波長至 450 奈米, 用蒸餾水調零.
2. 丙酮酸鈉標準溶液: 拿 100 µL 標準溶液, 稀釋到 1, 5, 0.25, 0.125, 0 微摩爾/毫升, 並使用 2, 1, 0.5, 0.25, 0.125, 0 μmol/ml作為標準曲線.

3. 樣本測試

試劑名稱 (微升)	試管(在)	控制管(乙醯膽鹼)	標準管(作為)
樣本	10	10	–
標準解決方案	–	–	10
試劑一	50	50	50
試劑二	10	–	–
蒸餾水	–	10	10
徹底混合, 孵育37℃(哺乳動物) 或25℃(其他物種) 水浴用於 15 分分鐘.
試劑三	50	50	50
徹底混合, 孵育37℃(哺乳動物) 或25℃(其他物種) 水浴用於 15 分分鐘.
試劑四	150	150	150

徹底混合, 放在室溫下 3 分分鐘. 拿 200 微玻璃比色杯/96個井底板中的反應溶液μl, 測量了吸光度 450 奈米, ΔA= AT-AC. 每個試管應設置一個控制管.

三、. 乳酸脫氫酶 計算.

1. 樣品丙酮酸鈉含量
2. 設置標準曲線, y軸作為標準濃度, 微摩爾/毫升, X軸為 450 NM吸收. 放置ΔA(X) 進入標準曲線, 計算y(微摩爾/毫升)
3. 血清 (電漿) 樣品LDH活性

單位定義: 一個酶活性的單位定義為酶的量催化產生的酶 1 每分鐘丙酮酸的nmol, 每毫升血清.

乳酸脫氫酶(單位/毫升)= y÷t×103 = 66.7×y

4. 組織, 細菌或培養細胞LDH活性

A. 蛋白質濃度:

單位定義: 一個酶活性的單位定義為酶的量催化產生的酶 1 每分鐘丙酮酸的nmol, 每毫克蛋白質.

乳酸脫氫酶(U/毫克蛋白質)= y÷t÷cpr×103 = 66.7×y÷cpr

乙. 樣品重量

單位定義: 一個酶活性的單位定義為酶的量催化產生的酶 1 每分鐘丙酮酸的nmol, 每克組織. 乳酸脫氫酶(u/g)= y÷t÷w×103 = 666.7×y

C. 細胞數量

單位定義: 一個酶活性的單位定義為酶的量催化產生的酶 1 每分鐘每分鐘的丙酮酸Nmol 10000 細胞.

乳酸脫氫酶(U/104單元)= y÷t÷500×103 = 0.133×y

VS: 超級體積 (毫升), 0.01 毫升; 電壓: 萃取液體積, 1 毫升; 時間: 反應時間, 15 分分鐘;

心肺復甦: 樣品蛋白濃度, 毫克/毫升; 瓦: 樣品重量, 0.1 G;

500: 細菌或細胞總數, 5 百萬; 103: 1 μmol/ml = 103 nmol/ml.

參考

[1] 黃P h, Fu L C, 黃, 等人. 寡乳醛酸的攝取及其對生長抑制的影響, 乳酸脫氫酶活性和人乳蛋白3的人類癌細胞釋放[J]. 食物化學, 2012, 132(4): 1987-1995.

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