แลคเตตดีไฮโดรจีเนส (แอลดีเอช) ชุดทดสอบกิจกรรม
บันทึก: ใช้ตัวอย่างที่แตกต่างกันสองหรือสามตัวอย่างเพื่อทำนายก่อนการทดสอบ.
อุปกรณ์การดำเนินงาน: เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์/เครื่องอ่านไมโครเพลท
หมายเลขแมว: BC0685
ขนาด:100ที/48ส
ส่วนประกอบ:
สารสกัดโซลูชั่น: 60 มล.×1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃；
รีเอเจนต์ I: 7 มล.×1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃.
รีเอเจนต์ II: ผง× 1. การจัดเก็บที่ -20 ℃. วิธีแก้ปัญหาการทำงาน: ละลายด้วย 1.3 ML ของน้ำกลั่นก่อนใช้งาน. มันสามารถแบ่งออกเป็น tubule หลังจากจับคู่, ซึ่งสามารถเก็บรักษาไว้เป็นเวลาสองสัปดาห์ที่ -20 ℃. หลีกเลี่ยงการแช่แข็งซ้ำ ๆ และการละลายรอบ.
รีเอเจนต์ III: 7 มล.×1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃.
รีเอเจนต์ IV: 25 มล.×1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃.
สารละลายมาตรฐานโซเดียม pyruvate: 1 มล (2 ไมโครโมล/มล) × 1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃.
รายละเอียดสินค้า:
แลคเตทดีไฮโดรจีเนส (LDH หรือ LD) เป็นเอนไซม์เทอร์มินัลของทางเดินไกลคอลซึ่งพบได้ในเกือบทุกเซลล์ที่มีชีวิต (สัตว์, พืช, และ prokaryotes). LDH เร่งการแปลงแลคเตทเป็นกรดไพรูวิคและด้านหลัง, ในขณะที่มันแปลง NAD+ เป็น NADH และกลับ.
NAD+ และกรดแลคติกจะถูกออกซิไดซ์เป็นกรดไพรูวิคโดยการเร่งปฏิกิริยาของ LDH. Pyruvate มีปฏิกิริยาต่อไปด้วย 2,4-dinitrophenylhydrazide เพื่อสร้าง pyruvate dinitrobenzone, ซึ่งแสดงสีแดงสีน้ำตาลในสารละลายอัลคาไลน์และความลึกของสีเป็นสัดส่วนกับความเข้มข้นของไพรูเวต.
รีเอเจนต์และอุปกรณ์ที่จำเป็นแต่ไม่ได้จัดเตรียมไว้ให้:
เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์/เครื่องอ่านไมโครเพลท, อ่างน้ำอุณหภูมิ, เครื่องหมุนเหวี่ยงบนโต๊ะ, ปิเปตแบบปรับได้, คิวเวทท์แก้วไมโคร/แผ่นก้นแบน 96 หลุม, ปูน/โฮโมจีไนเซอร์, น้ำแข็ง, น้ำกลั่น.
ขั้นตอน:
ฉัน. ตัวอย่าง การตระเตรียม:
- แบคทีเรีย, เซลล์, หรือตัวอย่างเนื้อเยื่อ:
แบคทีเรียหรือเซลล์:
การรวบรวมแบคทีเรียหรือเซลล์ลงในหลอดเซนติเมตร. ของเหลวในชั้นบนจะถูกทิ้งหลังจากการหมุนเหวี่ยง. อัตราส่วนของแบคทีเรีย/ปริมาณเซลล์ (104): สารสกัดสารละลาย (มล) คือ 500 ~ 1,000:1(ขอแนะนำให้ใช้เวลาเกี่ยวกับ 5 ล้านแบคทีเรีย/เซลล์และเพิ่ม 1 มิลลิลิตรของสารละลายสารสกัด). แบคทีเรียและเซลล์ถูกแยกด้วยอัลตราโซนิก (วางบนน้ำแข็ง, 200ว, เวลาทำงาน 3 วินาที, ช่วงเวลา 10 วินาที, ทำซ้ำเพื่อ 30 ครั้ง). เครื่องปั่นแยกที่ 8000 RPM 4 ℃สำหรับ 10 นาที, ใช้ซุปเปอร์โนแลนต์และวางลงบนน้ำแข็งเพื่อทดสอบ.
เนื้อเยื่อ:
ความสม่ำเสมอในการอาบน้ำน้ำแข็งดำเนินการตามอัตราส่วนของมวลเนื้อเยื่อ (ก): สารสกัดสารละลาย (มล) - 1: 5~10 (ขอแนะนำให้ใช้เกี่ยวกับ 0.1 กรัมของเนื้อเยื่อและเพิ่ม 1 มิลลิลิตรของสารละลายสารสกัด). การทำให้เป็นเนื้อเดียวกัน. เครื่องปั่นแยกที่ 8000 RPM และ 4 ℃สำหรับ 10 นาที, ใช้ซุปเปอร์โนแลนต์และวางลงบนน้ำแข็งเพื่อทดสอบ.
- เซรั่ม (พลาสมา)ตัวอย่าง:
ตรวจจับตัวอย่างโดยตรง.
ครั้งที่สอง. ขั้นตอน:
- เปิดเครื่องอ่านเครื่องอ่านสเปกโตรโฟโตมิเตอร์/ไมโครเพลท 30 นาที, ปรับความยาวคลื่นเป็น 450 นาโนเมตร, ตั้งศูนย์ด้วยน้ำกลั่น.
- สารละลายมาตรฐานโซเดียม pyruvate: เอา 100 ไมโครลิตรของสารละลายมาตรฐาน, เจือจาง 1, 5, 0.25, 0.125, 0 ไมโครโมล/มล, และใช้ 2, 1, 0.5, 0.25, 0.125, 0 μmol/ml เป็นเส้นโค้งมาตรฐาน.
- การทดสอบตัวอย่าง
| ชื่อรีเอเจนต์ (ไมโครลิตร) | หลอดทดลอง(ที่) | หลอดควบคุม(AC) | หลอดมาตรฐาน(เช่น) |
| ตัวอย่าง | 10 | 10 | – |
| โซลูชั่นมาตรฐาน | – | – | 10 |
| รีเอเจนต์ I | 50 | 50 | 50 |
| รีเอเจนต์ II | 10 | – | – |
| น้ำกลั่น | – | 10 | 10 |
| ผสมให้เข้ากัน, ฟักตัวที่ 37 ℃(สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม) หรือ 25 ℃(สายพันธุ์อื่น) อ่างน้ำสำหรับ 15 นาที. | |||
| รีเอเจนต์ III | 50 | 50 | 50 |
| ผสมให้เข้ากัน, ฟักตัวที่ 37 ℃(สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม) หรือ 25 ℃(สายพันธุ์อื่น) อ่างน้ำสำหรับ 15 นาที. | |||
| รีเอเจนต์ IV | 150 | 150 | 150 |
ผสมให้เข้ากัน, วางที่อุณหภูมิห้องสำหรับ 3 นาที. เอา 200 μlของสารละลายปฏิกิริยาใน micro glass cuvette/96 แผ่นแบนล่างดี, วัดการดูดกลืนแสงที่ 450 นาโนเมตร, ΔA = AT-AC. แต่ละหลอดทดสอบควรตั้งค่าหลอดควบคุม.
สาม. แอลดีเอช การคำนวณ.
- ตัวอย่างปริมาณโซเดียม pyruvate
- ตั้งค่าเส้นโค้งมาตรฐาน, แกน y เป็นความเข้มข้นมาตรฐาน, ไมโครโมล/มล, แกน X เป็น 450 การดูดซับ NM. ใส่Δa(x) เป็นเส้นโค้งมาตรฐาน, คำนวณ y(ไมโครโมล/มล)
- เซรั่ม (พลาสมา) ตัวอย่างกิจกรรม LDH
คำจำกัดความของหน่วย: กิจกรรมเอนไซม์หนึ่งหน่วยถูกกำหนดให้เป็นปริมาณของเอนไซม์ที่เร่งการผลิต 1 NMOL ของกรดไพรูวิคต่อนาที, เซรั่มทุกมิลลิลิตร.
แอลดีเอช(ยู/มล)= y ÷ t × 103 = 66.7 × y
- เนื้อเยื่อ, แบคทีเรียหรือเซลล์ที่เพาะเลี้ยงกิจกรรม LDH
ก. ความเข้มข้นของโปรตีน:
คำจำกัดความของหน่วย: กิจกรรมเอนไซม์หนึ่งหน่วยถูกกำหนดให้เป็นปริมาณของเอนไซม์ที่เร่งการผลิต 1 NMOL ของกรดไพรูวิคต่อนาที, โปรตีนทุกๆ มิลลิกรัม.
แอลดีเอช(U/มก)= y ÷ t ÷ cpr × 103 = 66.7 × y ÷ cpr
บี. น้ำหนักตัวอย่าง
คำจำกัดความของหน่วย: กิจกรรมเอนไซม์หนึ่งหน่วยถูกกำหนดให้เป็นปริมาณของเอนไซม์ที่เร่งการผลิต 1 NMOL ของกรดไพรูวิคต่อนาที, ในเนื้อเยื่อทุกกรัม. แอลดีเอช(u/g)= y ÷ t ÷ w × 103 = 666.7 × y
ค. จำนวนเซลล์
คำจำกัดความของหน่วย: กิจกรรมเอนไซม์หนึ่งหน่วยถูกกำหนดให้เป็นปริมาณของเอนไซม์ที่เร่งการผลิต 1 NMOL ของกรดไพรูวิคต่อนาทีทุก ๆ 10000 เซลล์.
แอลดีเอช(U/104 เซลล์)= y ÷ t ÷ 500 × 103 = 0.133 × y
เทียบกับ: ปริมาณซูเปอร์เนต (มล), 0.01 มล; เทียบกับ: สารสกัดสารละลาย, 1 มล; ต: เวลาเกิดปฏิกิริยา, 15 นาที;
ซีพีอาร์: ตัวอย่างความเข้มข้นของโปรตีน, มก./มล; ว: น้ำหนักตัวอย่าง, 0.1 ก;
500: จำนวนแบคทีเรียหรือเซลล์ทั้งหมด, 5 ล้าน; 103: 1 μmol/ml = 103 nmol/ml.
อ้างอิง
[1] Huang P H, fu l c, Huang C S, และคณะ. การดูดซึม oligogalacturonide และผลกระทบต่อการยับยั้งการเจริญเติบโต, กิจกรรม lactate dehydrogenase และ galactin-3 ปล่อยเซลล์มะเร็งของมนุษย์[เจ]. เคมีอาหาร, 2012, 132(4): 1987-1995.
สินค้าที่เกี่ยวข้อง
BC0740/BC0745 hexokinase(ฮ่องกง) ชุดทดสอบกิจกรรม
BC0540/BC0545 pyruvate kinase(PK) ชุดทดสอบกิจกรรม
BC2250/BC2255 kinase phosphoglycerate(PGK) ชุดทดสอบกิจกรรม
BC2270/BC2275 Fructose-Bisphosphate aldolase(FBA) ชุดทดสอบกิจกรรม
รีวิว
ยังไม่มีบทวิจารณ์